支原体qPCR最怕假阴性：样品真实污染，但是检测报阴性，直接给实验或者生产埋下重大隐患。总结四大假阴性元凶：

① 样本没有富集，支原体浓度低于试剂盒检出限。低污染样本，直接取少量上清，目标DNA太少，直接漏检。解决：BPMPro100使用2 mL样本高速离心富集沉淀支原体颗粒。

② 样本基质存在PCR抑制物。血清、胰酶、细胞裂解物含有蛋白、多糖，抑制Taq酶扩增。只有抽提前加入独立IC内标，才能识别抑制。只在PCR阶段加内参，无法反映提取环节的抑制。

③ 探针引物物种覆盖不全。部分试剂盒只针对猪鼻、发酵支原体少数几个常见株，遇到莱氏无胆甾原体等药典规定菌株会漏检。翼和试剂盒覆盖90+支原体、脲原体、无胆甾原体。

④ 核酸降解：样本放置太久，支原体DNA降解。内标同步降解，Ct整体抬升。

翼和生物BPMPro100依靠抽提阶段IC内部质控，可同时识别降解、抑制、回收率低下三大问题，从源头降低假阴性风险。

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