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石蜡油在支原体qPCR里面到底起到什么作用?能不能省略?

已有 135 次阅读 2026-10-21 13:24 |个人分类:支原体|系统分类:科普集锦

细心的小伙伴会发现翼和两款试剂盒都配备石蜡油组分,不少用户疑惑:现在qPCR管密封性很好,石蜡油是不是多余,可以省掉不加?

不建议省略石蜡油! 支原体qPCR最大风险是扩增产物气溶胶交叉污染。qPCR扩增后会产生大量支原体DNA扩增子。开盖、离心、封膜操作,会产生气溶胶漂浮在操作台。后续实验样本就会被扩增产物DNA污染,出现假阳性。

石蜡油覆盖在反应液上层,物理隔绝水相反应体系与上层空气,闭管条件下抑制水相挥发,减少气溶胶生成,尤其适合需要多次开盖加模板的30 μL体系。

注意加样顺序:先分装Mix,再加石蜡油,最后穿过油层加入模板DNA。 省略石蜡油不是完全做不出结果,但是会显著提升实验室假阳性风险。

市面上部分试剂盒省去石蜡油,对实验室防污染操作提出极高要求。翼和支原体试剂盒配套石蜡油,降低普通实验室操作门槛。



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