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狂犬病免疫力检测(9)

已有 256 次阅读 2026-7-8 08:36 |个人分类:狂犬病防治|系统分类:科普集锦

狂犬病免疫力检测(9)

前记:

目前国际上关于狂犬病研究最权威最全面的大型学术专著是《狂犬病：科学基础和管控（RABIES: SCIENTIFIC BASIS OF THE DISEASE AND ITS MANAGEMENT）》，简称《狂犬病(RABIES)》。该书最新版（第4版）已于2020年5月面世。

该书共有22章，其中第13章是《Measures of rabies immunity(狂犬病免疫力检测）》。现将此章的内容全文翻译成中文供参考。

第13章狂犬病免疫力检测(9)

（Measures of rabies immunity）

2 狂犬病血清学方法(6)

(Rabies serology methods)

2.2 ELISA、IFA 和免疫层析检测 (2)

（ELISA, IFA, and immunochromatographic assays）

早期的ELISA方法，如Nicholson和 Prestage (1982)所描述的方法，使用灭活的全病毒作为抗原，抗IgG作为二抗。与IFA相比，该技术提供了更高的特异性，因为结合的唯一来源是包被在孔表面的全病毒，而不是在存在其他抗原作为干扰抗体潜在靶点的细胞中。ELISA方法采用的二抗可能是物种特异性的，但如果使用葡萄球菌Protein A 或 G，该方法可应用于多个物种的样本，因为 Protein A/G 与许多物种IgG的Fc部分结合 (Goding, 1978; Page & Thorpe, 2002)。

其他类型的 ELISA 包括竞争法 (cELISA) 和阻断法ELISA。两种方法都涉及使用标记的 RABV抗体，该抗体用于与检测样本中的 RABV 抗体竞争 (cELISA) 或检测未被检测样本中的 RABV 抗体阻断的抗原 (阻断法 ELISA)。在阻断法 ELISA 中，将血清样本与孔表面上的灭活 RABV 抗原孵育，然后加入酶标记的抗 RABV 抗体。任何未结合（未阻断）的灭活 RABV 都被标记抗体结合。通过加入显色结合物来检测酶标记抗体的量；血清样本中 RABV 抗体的量与显色强度成反比。通过使用标准曲线和光密度 (OD) 读数仪可以定量检测血清中的抗体水平。

血清样本中的抗 RABV 抗体与标记的抗 RABV 单克隆抗体之间竞争 RABV 结合是 cELISA 的基础 (see Fig. 13.4)。与阻断法 ELISA 类似，测量标记抗体并用于确定样本中抗 RABV 抗体的水平。这两种方法都可以减少非特异性结合的影响，因为所测量的抗体是纯化的试剂抗体。在这些检测中使用不同的试剂单克隆抗体可以检测样本中可能存在的各种特异性的 RABV 抗体（即使用标记的抗 RABV N 将检测样本中的抗 N，使用标记的抗 RABV G 将检测样本中的抗 G）。Korimbocus、Dehay、Tordo、Cano 和 Morgeaux (2016) 在一项研究中利用此类检测法测量马狂犬病免疫球蛋白产品的效力。产品中的 F(ab')2 分子与靶向狂犬病糖蛋白三聚体形式（天然形式）中抗原位点 II 的单克隆抗体混合。检测结果与 MNT 相匹配，相关性为 r¼0.751；然而，与 RFFIT 相比，cELISA 结果系统地更高且更具变异性。

阻断法和竞争法 ELISA 由于其敏感性、特异性和标准化，已在口服狂犬病疫苗计划的监测中得到应用 (Moore et al., 2017; Wasniewski et al., 2013; Wasniewski et al., 2016)。跨计划和区域比较结果的能力有助于更好地了解这些计划在不同时间和地点的成功程度。

FIG. 13.4 竞争法 ELISA。