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狂犬病免疫力检测(6)

已有 825 次阅读 2026-6-30 13:59 |个人分类:狂犬病防治|系统分类:科普集锦

狂犬病免疫力检测(6)

前记:

目前国际上关于狂犬病研究最权威最全面的大型学术专著是《狂犬病：科学基础和管控（RABIES: SCIENTIFIC BASIS OF THE DISEASE AND ITS MANAGEMENT）》，简称《狂犬病(RABIES)》。该书最新版（第４版）已于2020年5月面世。

该书共有22章，其中第13章是《Measures of rabies immunity(狂犬病免疫力检测）》。现将此章的内容全文翻译成中文供参考。

第13章狂犬病免疫力检测(6)

（Measures of rabies immunity）

2 狂犬病血清学方法(3)

2.1 血清中和试验(3)

正如一项直接对比 RFFIT 与 FAVN 的研究所显示的那样，在严格遵守质量保证标准的实验室中开展这两项试验时，其结果无统计学显著差异(Briggs et al., 1998)；而实验室间交换样本组的实践也表明，即便不同实验室对原始 RFFIT 进行了改良，仍可获得具有可比性的结果（见表13.1）。即便在同一实验室内，也建议常规开展方法学比对。堪萨斯州立大学狂犬病实验室在2018年进行的一项实验室方法比对显示，RFFIT 与 FAVN 之间存在相关性，其相对于已知 IU/mL 值的平均回收率分别为111%和87%。病毒中和试验结果的精密度与重复性，可通过严格控制所用攻击病毒的剂量与毒株，以及标准参考血清的来源来实现。早期发表的、对不同实验室 RFFIT 结果进行比较的报告指出，使用高感染剂量的攻击病毒会降低低滴度血清检测的灵敏度，而使用低剂量攻击病毒则可能导致在高滴度血清（如 RABV 免疫球蛋白，RIG 制剂）检测中精密度下降(Fitzgerald, Baer, Cabasso, & Vallancourt, 1975)。此外，若使用马源 RIG 作为参考标准来确定 IU/mL 值，所得滴度结果与使用人源 RIG 参考标准时相比存在显著差异(Lyng, Bentzon, & Fitzgerald, 1989)。当检测接种过疫苗的患者的 RVNA 时，如果疫苗所用的亲本病毒株与 RFFIT 中使用的攻击病毒株（通常为 CVS-11）不同源，测得的滴度可能低于使用同源攻击毒株时的结果(Moore, Ricke, Davis, & Briggs, 2005)。RABV 中和试验可识别样本中存在的所有类别免疫球蛋白（包括 IgM 和 IgG），因此能够检测到暴露或疫苗接种后早期产生的 RABV 抗体，但其灵敏度可能不如 IFA(Smith, 1991)。由于病毒中和试验依赖于对感染细胞的残余或“未中和”RABV 的检测，血清或培养基中若存在对细胞生长（并最终影响病毒增殖）产生不利影响的干扰因素，就会通过非特异性抑制病毒增殖来模拟病毒中和作用(Rudd, Appler, & Wong, 2013)。任何并非由狂犬病特异性中和抗体直接导致的病毒增殖抑制，都会造成假阳性结果。正因如此，加之在低血清稀释度下可能存在交叉反应抗体或其他免疫调节蛋白对SN（血清中和）方法的干扰，至关重要的是对试验进行验证，明确检测下限（LOD）与定量下限（LLOQ），才能对结果做出准确解读。现实中经常出现这样的情况：未被确认为由 RVNA 特异性引起的低水平阳性结果被当作真阳性处理，从而导致误导性结论。

对SN（血清中和）试验中许多步骤实现自动化，可提高准确度与精密度，这些步骤包括向微孔板加培养基、血清样本的系列稀释、加病毒和抗 RABV 结合物，以及一些更为繁琐的步骤如洗板。FAVN 和 RFFIT 的自动读板可减少显微镜分析读数的工作时间，并有助于最大限度降低误差(Peharpre et al., 1999)。结合成像灵敏度与适应性、机器人技术和软件分析的自动读板技术不断进步，使得高通量和标准化的高质量 SN 结果成为可能(Burgado et al., 2018)。然而，用于自动读取 RFFIT 或 FAVN 的设备成本高昂，同时要求细胞单层状态稳定一致，并且需要高质量的 FITC 结合物，这些因素限制了此类改进的实际可行性，特别是对于检测通量不大的实验室而言。作为显微荧光测量的替代方案，微量中和试验（RAMIN）、间接免疫过氧化物酶病毒中和（IPVN）技术及改良 FAVN 采用小鼠抗 RABV 抗体和过氧化物酶标记抗小鼠结合物，可通过分光光度计实现自动读数(Cardoso, Silva, Albas, Ferreira, & Perri, 2004; Hostnik, 2000; Mannen et al., 1987)。上述各项研究均证实，传统 RABV 中和方法与各自试验的改良版本之间具有良好的相关性。还有一些改良方案利用分子技术制备重组病毒，以替代标准攻击病毒 CVS-11，用于荧光信号的标准化，或适配检测不同特异性的抗体。表达绿色荧光蛋白（GFP）的改良 CVS-11 消除了对抗 FITC 标记抗 RABV 抗体的需求(Burgado et al., 2018; Khawplod et al., 2005)。据报道，将该改良 CVS-11 与流式细胞术联用，可在血清孵育后检测任何残余病毒的存在，从而提高灵敏度。这是因为可对每单个细胞的病毒感染情况进行评估，从而获得更精确的病毒抑制百分比；但仪器成本较高，可能限制其可及性(Bordignon et al., 2002)。