狂犬病免疫力检测(5)

前记: 

目前国际上关于狂犬病研究最权威最全面的大型学术专著是《狂犬病：科学基础和管控（RABIES: SCIENTIFIC BASIS OF THE DISEASE AND ITS MANAGEMENT）》，简称《狂犬病(RABIES)》。该书最新版（第４版）已于2020年5月面世。

该书共有22章，其中第13章是《Measures of rabies immunity(狂犬病免疫力检测）》。现将此章的内容全文翻译成中文供参考。

第13章 狂犬病免疫力检测(5)

（Measures of rabies immunity）

2 狂犬病血清学方法(2)

(Rabies serology methods)

2.1 血清中和试验(2)

(Serum neutralization assays)

   图13.2 RFFIT流程。

1. 将血清在96孔板中进行系列稀释，并转移至八孔腔室载玻片( chamber slides)中。

2. 向稀释后的血清中加入狂犬病攻击病毒，将载玻片在37°C下孵育90分钟。

3. 随后向每个孔中加入仓鼠肾(BHK)细胞或小鼠神经母细胞瘤(MNA)细胞。将载玻片置于2%–5% CO₂培养箱中，在37°C下孵育20–24小时。

4. 含有贴壁单层细胞的孔经洗涤后，用80%冷丙酮固定细胞。

5. 加入针对RABV N蛋白的抗狂犬病FITC标记抗体，以检测病毒感染细胞。

在八孔载玻片中，使用荧光显微镜检查每个孔的20个视野，观察细胞中出现荧光的迹象，该迹象表明存在未中和的RABV。 待分析血清样本中RVNA的滴度定义为：在50%的观察显微镜视野中包含一个或多个感染细胞时的稀释度。

将血清稀释值转换为标准化且在世界范围内更受认可的IU/mL单位，可通过简单的计算得出，即将待测血清样本的数值与含有特定量（效价）RVNA的参考血清标准的血清稀释值进行比较(Velleca & Forrester, 1981)。将滴度结果转换为IU/mL对于标准化数值尤为重要，特别是当需要在实验室之间和时间跨度上比较结果时，因为滴度值取决于该批次检测中的病毒剂量和特定实验室。IU/mL值可控制不同检测批次和不同实验室之间的变异性。这在实验室修改标准检测步骤时尤其适用（例如，病毒株/剂量、参考血清、细胞类型、平台、显微镜读数方法）。参见表13.1，该表显示虽然不同实验室对同一样本产生的滴度值变异性很大（高CV%），但当转换为IU/mL值后，精密度（CV%）大大提高。检测组分的质量以及执行检测的技术人员（包括对显微镜读数进行分析）的技能和专业知识，都会显著影响RFFIT检测结果的精密度。为了简化和减少显微镜计数步骤的主观性，FAVN方法使用微孔板进行三折稀释，每个血清样本设置四个复孔。它还在孵育48小时后，将每个孔评定为存在或不存在RABV感染细胞（阳性或阴性）。

    表13.1  RFFIT交换试验结果（九个国际RFFIT实验室对六个样本组的比较）表明，以IU/mL值表示的测量精密度更高（平均CV%为31.3%），优于滴度值（平均CV%为47.4%）。

当比较滴度值时，各实验室对每个样本测量的可变范围更广。考虑到该组中的一些RFFIT实验室修改了标准RFFIT程序（采用修改后的RFFIT），各实验室之间的结果也显示出良好的IU/mL可比性。平均值和CV值以粗体和斜体显示，以区别于实验室数值。

（未完待续） 

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权威的大型学术专著《狂犬病（Rabies）》最新版已面世　（https://mp.weixin.qq.com/s/7v3fyBpGaHqHUZbZgPc3fw） 

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