Rentosertib（INS018_055）是靶向 TRAF2 与 NCK 相互作用激酶（TNIK）的小分子抑制剂，也是全球首个由生成式人工智能完成靶点发现与分子设计的候选分子：其靶点 TNIK 是通过多组学整合、因果推断与衰老相关评分从纤维化组织中优先排序产生，分子骨架则由生成式化学平台设计优化。TNIK 是位于 Wnt、TGF-β、Hippo/YAP-TAZ、JNK 与 NF-κB 等多条促纤维化与炎症通路交汇处的丝氨酸/苏氨酸激酶，Rentosertib 为解析这一枢纽激酶的生物学功能提供了高选择性的调控工具。

在科学研究方面，Rentosertib（CAS No.：2828567-39-9，AbMole，M55626）作为一种双咪唑甲酰胺类的工具化合物，能结合TNIK 的激酶结构域，共晶结构与表面等离子共振（SPR）测定显示其解离常数Kd为 4.32 nM，酶学IC₅₀为 31 nM。在覆盖 430 种激酶的选择性谱中，TNIK 是被抑制最强的靶点，次优靶点为 ALK4、TGFBR1、DDR1 等纤维化相关激酶。TNIK 被Rentosertib抑制后，其 Ser764 位点磷酸化水平下降，核内 TNIK/TCF4/β-catenin 转录复合体活性受抑，并连锁下调 TGF-β/SMAD2/3 与 TNF-α/NF-κB 信号输出，从转录层面削弱细胞的促纤维化程序。

Rentosertib（INS018_055，AbMole，M55626）可用于多种细胞系抗纤维化的研究。在 MRC-5 肺成纤维细胞中，其剂量依赖性抑制 TGF-β 诱导的 α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达，IC₅₀ 为 27.14 nM，而细胞毒性 CC50 高达 84.3 μM；在原代肺成纤维细胞中抑制 α-SMA 的 IC₅₀ 为 50-79 nM，在原代支气管上皮细胞中抑制纤连蛋白（FN1）的 IC₅₀ 为 250-400 nM，效价显著优于阳性对照Nintedanib（BIBF 1120，1.6-7.9 μM）。在 A549 细胞中，Rentosertib能逆转 TGF-β 诱导的上皮－间质转化（E-cadherin 上调、N-cadherin 与 p-SMAD2 下调），并抑制 p-p65 与 β-catenin 核转位。Rentosertib在 HK-2 肾小管上皮细胞（α-SMA IC₅₀ = 0.104 μM）及正常人真皮成纤维细胞（α-SMA、FN1、I 型前胶原 IC50 分别约 25、135、232 nM）中同样有效。此外，Rentosertib（INS018_055）还在阿霉素（Doxorubicin）诱导的 IMR-90 细胞衰老模型中，表现出衰老形态调节（Senomorphic）活性：即浓度依赖性的减少 SA-β-gal 阳性细胞并下调 IL6、IL8、IL1A、IL1B 等 SASP（衰老相关分泌表型）因子的水平。

图： Rentosertib对TNIK的抑制机理和对 α-SMA等蛋白的IC₅₀检测

Rentosertib（CAS No.：2828567-39-9，AbMole，M55626） 还可用于啮齿类多器官纤维化模型的研究。在博来霉素（Bleomycin）诱导的 C57BL/6 小鼠肺纤维化模型中，实验小鼠以3、10、30 mg/kg 每日两次口服Rentosertib可呈现剂量依赖性改善第 21 天肺功能（Penh）、降低改良 Ashcroft 评分，Masson 染色显示纤维化面积显著缩小，胶原 I 与 α-SMA 免疫组化阳性区域减少，效果与Nintedanib（BIBF 1120）的60 mg/kg 对照组相当，并且还能与Pirfenidone（AMR69，吡非尼酮）联用呈现协同效应。Rentosertib在 LPS（Lipopolysaccharides，脂多糖）诱导的急性肺损伤模型中，能够降低灌洗液淋巴细胞计数及 IL-6、TNF-α 等炎症因子水平。在博来霉素（Bleomycin）皮下注射诱导的 SD 大鼠皮肤纤维化模型中，0.05%—0.45% 的Rentosertib局部给药可显著降低皮肤胶原与羟脯氨酸含量，提示其具有抗皮肤纤维化的活性。

综上，Rentosertib（INS018_055，AbMole，M55626）以高亲和力和高选择性靶向TNIK 这一纤维化信号枢纽，是可用于多器官纤维化模型与细胞衰老模型研究的高品质工具化合物。

* 本文所述均为科研试剂，仅供科学研究参考

[1] Ren F, et al. A small-molecule TNIK inhibitor targets fibrosis in preclinical and clinical models. Nature Biotechnology, 2025, 43(1): 63-75.

[2] Aladinskiy V, et al. Discovery of bis-imidazolecarboxamide derivatives as novel, potent, and selective TNIK inhibitors for the treatment of idiopathic pulmonary fibrosis. Journal of Medicinal Chemistry, 2024, 67(21): 19121-19142.

[3] Tang Q, et al. AI-driven robotics laboratory identifies pharmacological TNIK inhibition as a potent senomorphic agent. Aging and Disease, 2025, 17(1): 432-451.

[4] Mahmoudi T, et al. The kinase TNIK is an essential activator of Wnt target genes. The EMBO Journal, 2009, 28(21): 3329-3340.

[5] Masuda M, et al. TNIK inhibition abrogates colorectal cancer stemness. Nature Communications, 2016, 7: 12586.

细胞实验参考

细胞系：Normal human lung fibroblast IMR-90 cell line

方法：Chemotherapy-induced cellular senescence was established via 2 h pre-incubation with 625 nM doxorubicin; senescence levels were quantified by senescence-associated β-galactosidase (SA-β-gal) staining coupled with high-content imaging analysis; mRNA expression levels of SASP cytokines (IL6, IL8, TGFB1, IL1A, IL1B) and cell cycle regulators were detected by quantitative real-time PCR; phosphorylation status of TNIK (Ser764), SMAD2/3 and extracellular matrix proteins (fibronectin, MMP2) were analyzed by Western blotting

浓度：0.3, 1, 3 μM (for replicative senescence model); 1.25, 10 μM (for doxorubicin-induced acute senescence model)

处理时间：72 h for drug treatment after 2 h doxorubicin pre-induction; 8 weeks for long-term replicative senescence treatment

参考文献：Aging Dis. 2024;15 (3):729-751

上述方法来自公开文献，仅供相同目的实验参考。如实验目的、材料、方法不同，请参考其他文献。

动物实验参考

动物模型：Male C57BL/6 mice, 6–8 weeks old, bleomycin-induced pulmonary fibrosis model

配制：Suspended in 0.5% methylcellulose and 0.1% Tween 80 sterile aqueous solution for oral gavage

剂量：3, 10, 30 mg/kg

给药处理：Oral gavage, twice daily for 2 consecutive weeks, initiated 7 days after intratracheal bleomycin instillation; lung function parameters, fibrotic lesion area, and expression levels of α-SMA and collagen type I in lung tissues were evaluated at experimental endpoint

参考文献：Aging Dis. 2024;15 (3):729-751

上述方法来自公开文献，仅供相同目的实验参考。如实验目的、材料、方法不同，请参考其他文献。

体内实验的工作液，建议现用现配，当天使用；如在配制过程中出现沉淀、析出现象，可以通过超声和（或）加热的方式助溶。切勿一次性将产品全部溶解。

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