博文

D-Luciferin 是荧光素酶 (Luc) 的天然底物 |MedChemExpress (MCE)

已有 120 次阅读 2024-11-7 09:41 |系统分类:科研笔记

D-Luciferin potassium | D-荧光素钾盐

MCE 国际站：D-Luciferin potassium

品牌：MedChemExpress (MCE)

CAS：115144-35-9

纯度：99.97%

分子式：C₁₁H₇KN₂O₃S₂

分子量：318.41

存储条件： 4°C，密封保存，防潮，避光

运输条件：美国大陆的室温；其他地区可能有所不同。

产品活性：D-Luciferin 是荧光素酶 (Luc) 的天然底物，对萤火虫产生典型的黄绿光进行催化。该反应产生的 560 nm 化学发光在几秒钟内达到峰值，当底物荧光素过量时，光输出与荧光素酶浓度成正比。荧光素酶 (luc) 基因是研究和活性分子筛选的常用报告基因。化学发光技术实际上是无背景的，使得 luc 报告基因成为检测低水平基因表达的理想选择。在标准荧光计数仪中可以可靠地测量到 0.02 pg 的荧光素酶。除了用于基因表达的外，荧光素酶还用于 ATP 的检测。MCE提供萤火虫荧光素酶 (HY-P1004) 、荧光素游离酸 (HY-12591A) 及其水溶性钠盐 (HY-12591) 和钾盐 (HY-12591B) 。

生物活性：D-荧光素是酶荧光素酶 (Luc) 的天然底物，该酶可催化萤火虫产生典型的黄绿色光。该反应产生的 560 nm 化学发光在数秒内达到峰值，当底物荧光素过量存在时，光输出与荧光素酶浓度成正比。荧光素酶 (luc) 基因是一种用于研究和药物筛选的常用报告基因。化学发光技术几乎无背景，使 luc 报告基因成为检测低水平基因表达的理想选择。在标准闪烁计数器中可以可靠地测量少至 0.02 pg 的荧光素酶。除了作为基因表达的报告者之外，荧光素酶还常用于极其敏感的 ATP 检测[1]。我们提供萤火虫荧光素酶（HY-P1004）、荧光素游离酸（HY-12591A）以及其水溶性钠盐（HY-12591）和钾盐（HY-12591B）。

体外：1.操作前注意事项 a) D-Luciferin 在 100 mM 的水性缓冲液 (pH 6.1-6.5) 中易于溶解。储备溶液可在不含 ATP 的水中制成，并储存在 -20℃ 的温度下，以防光线照射。游离酸必须用适当的碱中和以溶解。在pH值下，荧光素经过碱催化的脱氢脲醛生成，以及外消旋成L-异构体。 b) D-Luciferin 可用于任何现有的报告检测或 ATP 检测系统。 c) 如果检测 ATP，需要戴手套和使用不含 ATP 的容器，尽量减少所有可能的 ATP 污染源。只使用无菌的不含 ATP 的水和试剂。所有试剂制剂使用蒸压水。 2.实验操作此说明仅提供实验参考，具体实验方法张力具体实验进行更改。 2.1 体外成像实验示例 a) 在无菌水中制备100 mM (100-200X) 荧光素储备溶液拌匀。立即使用或一次性等份使用，并在-20℃ 下储存，避免冻融循环，避免暴露在阳光下。 b) 在预热过的组织培养液中配制0.5-1 mM D-Luciferin工作液 c) 除去细胞中的培养基。 d) 在细胞结合D-Luciferin工作液，成像前37℃孵育细胞5-10分钟。 2.2 体内成像实验示例 a) 在DPBS中制备15 mg/mL荧光素储备溶液，不含Mg2+和Ca2+拌匀。 b) 过滤器通过0.2μm过滤器对溶液进行灭菌。立即使用，或一次性等份使用，并在-20℃下储存，避免冻融循环，避免暴露在阳光下。 c) 成像前10-15分钟，以150 mg/kg (或10 μL/g荧光素储备溶液)的动物体重腹腔注射D-Luciferin。注：应选择一个动物模型进行D-Luciferin动力学研究，不确定峰值信号时间。 2.3 基因检测实验示例 a) 在无菌水中制备100 mM 荧光素储备溶液。立即使用，或一次性等份使用，并在-20℃下储存，避免冻融循环，避免暴露在阳光下。 b) 在 25 mM tricine Buffer (pH 7.8) 中制备含有 3 mM ATP、1 mM DTT 和 15 mM MgSO4 的 1 mM D-Luciferin 工作溶液。 c) 用移液管将 5-10 μL 细胞裂解液移到微孔板中。使用不含裂解物的裂解试剂或缓冲液作为空白对照。 d) 根据说明，使用荧光素工作溶液为光度计注入底部。 e) 立即注入 200 μL D-Luciferin工作溶液，结合时间为10秒。 MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。 0 --> D-荧光素钾相关抗体：苏丹I抗体（YA905）

体内：生物发光成像 (BLI) 使用萤火虫荧光素酶 (Fluc) 作为报告基因，D-荧光素作为底物，是目前应用最广泛的技术。将总信号强度与 D-荧光素注射后的时间作图，以生成时间-强度曲线。除了峰值信号之外，注射 D-荧光素后固定时间点 (5、10、15 和 20 分钟) 的信号也被确定为峰值信号的替代。给定时间-强度曲线中的信号根据曲线中的峰值信号进行归一化，以表示注射 D-荧光素后的时间变化模式[3]。每克体重注射 10 μL D-荧光素 (腹膜内或静脉内) 原液：标准 150 mg/kg 注射液，20 克小鼠通常注射约 200 μL。在室温下解冻 D-荧光素（钾盐或钠盐），并溶解在 dPBS（不含钙或镁）中，最终浓度为 15 mg/mL。通过 5-10 mL 无菌 H2O 预湿 0.22 μm 过滤器并弃水。通过准备好的 0.22 μm 注射器过滤器对 D-荧光素溶液进行灭菌。MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

动物实验：在接种 HCT116-Luc 细胞后 3、5、7、10、12、14、19、21、24 和 28 天，使用冷却电荷耦合器件摄像系统 (IVIS Imaging System 100) 进行体内 BLI。小鼠皮下注射 100 μL 磷酸盐缓冲盐水中的 75 mg/kg D-荧光素。注射后 5 分钟开始，以每分钟一张的速度连续获取曝光时间为 1 秒的背部发光图像，直至注射 D-荧光素 20 分钟后。由于光发射的时间过程延长，数据采集持续到第 3 天或第 5 天的注射后 40 分钟以及第 7 天的 25 分钟。Binning 为 4，视野为 15 厘米。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

参考文献：[1]. Giuseppe Meroni, et al. D-Luciferin, derivatives and analogues: synthesis and in vitro/in vivo luciferase-catalyzed bioluminescent activity. ARKIVOC 2009 (i) 265-288.

[2]. Inoue Y, et al. Timing of imaging after d-luciferin injection affects the longitudinal assessment of tumor growthusing in vivo bioluminescence imaging. Int J Biomed Imaging. 2010;2010:471408.

[3]. Rajesh Shinde, et al. Luciferin derivatives for enhanced in vitro and in vivo bioluminescence assays. Biochemistry. 2006 Sep 19;45(37):11103-12.