不知道大家有没有和我一样的经历，辛辛苦苦忙了两三个月做的RT-QPCR发现实验数据似乎没有什么用！主要原因在于生物学重复非常差！而造成的原因除了个体基因表达的差异外，盆栽实验的水肥控制，温室的室温控制，取样部位差异等等都是造成生物学重复差的原因。在苦苦挣扎上述错乱数据半个多月后，决定明年再来，直接改大田实验，同时扩大材料数量，避免无材料可取！

今天为什么突然要写这个呢？似乎事情也早已过去，实验室大Boss突然问起我关于之前做的QPCR的结果，我就把种种原因分析给大Boss，潜话就是这次数据只能当一个预实验了，但是大Boss说不行，你得把数据拿出来重新看看，相信总能挖掘出一些东西，不能浪费这么多时间金钱，最后放弃在出结果之前。于是就在网上各处游荡，想找出现同样问题的各位是如何解决的，给我提供一个参考。

终于有一个重要发现，可能对于熟悉QPCR的大佬来说，这是一个小case。但是却使我抽丝剥茧，从我之前错乱数据中找到了一个很有趣的位点。下面是给我启发的博客原地址：http://blog.sina.com.cn/s/blog_c59b7d1e0102wvok.html

辛亏之前不嫌麻烦设了两个内参，参考两个内参相对表达量的数据，将内参表达奇异的整个所有数据全部剔除，得到了目前来说对我很重要的趋势图！希望也能给大家带来一些帮助。