一、实验动物的病原微生物检测

实验动物是生物医学和生物医药领域的重要组成部分，需要对实验动物进行定期的检测，看实验动物携带的病原微生物的情况。为保障实验动物质量符合《实验动物 微生物学等级及监测》（GB 14922.1-2022）等国家标准，降低病原微生物污染对实验结果的干扰、以及对实验人员的健康风险及实验室生物安全隐患，需要定期对实验动物进行病原微生物的筛查，精准筛查实验动物携带的致病性、条件致病性病原微生物，为科研实验的科学性、可靠性和安全性提供基础支撑。

实验动物病原微生物筛查适用于使用的实验动物（包括小鼠、大鼠、兔、豚鼠、犬、猴等），涵盖实验动物引种、验收、日常饲养监测等流程，涉及细菌、真菌、病毒、支原体、寄生虫等各类病原微生物的检测工作。

二、翼和生物大鼠小鼠检测试剂盒

翼和生物开发了针对无特定病原体级SPF的实验大鼠小鼠的病毒、细菌、真菌、支原体的多重qPCR检测试剂盒，包含如下内容。

必检项目：支原体Ms、泰泽病原体Cp、铜绿假单胞菌Pa、鼠棒状杆菌Ck、嗜肺巴氏杆菌Pp、支气管鲍特杆菌Bb、沙门氏菌属Ss、肺炎克雷伯菌Kp

必要时检测项目：金黄色葡萄球菌Sa、β-溶血性链球菌属BHS、牛棒状杆菌Cb、念珠状链杆菌Sm、柠檬酸杆菌Cr、肺孢子菌Ps、肺炎链球菌Sp

其中牛棒状杆菌Cb是免疫缺陷鼠必检项目

必检项目：Ⅲ型呼肠孤病毒Reo-3、仙台病毒SV、小鼠肝炎病毒MHV、汉坦病毒HANT、小鼠肺炎病毒PVM、小鼠细小病毒MVM、大鼠细小病毒KRV、大鼠细小病毒H-1

必要时检测项目：淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒LCMV、小鼠诺如病毒MNV、大鼠冠状病毒RCV、鼠痘病毒Ect、小鼠脑脊髓炎病毒TMEV、多瘤病毒POLY

其中小鼠诺如病毒MNV是免疫缺陷鼠必须检测项目

3.1 采样

粪便采样：用无菌棉签采集新鲜粪便，放入无菌离心管。

组织采样：无菌操作采集气管、肝、脾、肺、淋巴结等组织，每块组织约20-50mg。

分泌物采样：采集动物鼻腔、口腔、眼结膜分泌物，用无菌棉签擦拭后，放入无菌生理盐水试管中。

3.2 样品核酸提取

样本加入相应的裂解液后进行研磨，加入溶菌酶和蛋白酶K加热，预处理后，进行核酸提取，包括DNA提取和RNA提取。

3.3 qPCR检测实施

样品中的病毒和病原菌提取核酸后，采用特异性引物进行qPCR扩增，通过扩增曲线和Ct值，判断是否存在目标病原菌或者病毒。

对于检测出阳性信号的样本，表明样本中存在病原微生物，需要通过鉴定试剂盒进一步鉴定到底存在那种病原微生物。

联检试剂盒：国标病毒必检八项、国标病毒选检六项、国标病原菌必检八项、国标病原菌选检七项。联检试剂盒中一个荧光通道可以同时检测2-3种病原体，但是不区分这2-3种病原，也就是说一旦这个荧光通道有信号阳性，那么这2-3种病原体都有可能是阳性。

联检试剂盒包含：

SPF级大小鼠病原体质量控制多重qPCR联检试剂盒（国标病毒必检八项）

SPF级大小鼠病原体质量控制多重qPCR联检试剂盒（国标病毒选检六项）

SPF级大小鼠病原体质量控制多重qPCR联检试剂盒（国标病原菌必检八项）SPF级大小鼠病原体质量控制多重qPCR联检试剂盒（国标病原菌选检七项）

鉴定试剂盒：我们开发了十款鉴定试剂盒。鉴定试剂盒中一个荧光通道只鉴定一种病原，所以可以通过荧光通道直接判断感染的具体病原体。我们的联检试剂盒可以搭配鉴定试剂盒使用。

鉴定试剂盒包含：

Ⅲ型呼肠孤病毒Reo-3、仙台病毒SV、小鼠肝炎病毒MHV 多重qPCR鉴别试剂盒

汉坦病毒HANT、小鼠肺炎病毒PVM、小鼠细小病毒MVM 多重qPCR鉴别试剂盒

大鼠细小病毒KRV、大鼠细小病毒H-1 多重qPCR鉴别试剂盒

淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒LCMV、小鼠诺如病毒MNV、大鼠冠状病毒RCV 多重qPCR鉴别试剂盒

鼠痘病毒Ect、小鼠脑脊髓炎病毒TMEV、多瘤病毒POLY 多重qPCR鉴别试剂盒

支原体Ms、泰泽病原体Cp、铜绿假单胞菌Pa 多重qPCR鉴别试剂盒

鼠棒状杆菌Ck、嗜肺巴氏杆菌Pp、支气管鲍特杆菌Bb 多重qPCR鉴别试剂盒

沙门氏菌属Ss、肺炎克雷伯菌Kp 多重qPCR鉴别试剂盒

金黄色葡萄球菌Sa、β-溶血性链球菌属BHS、牛棒状杆菌Cb 多重qPCR鉴别试剂盒

念珠状链杆菌Sm、柠檬酸杆菌Cr、肺孢子菌Ps 多重qPCR鉴别试剂盒