之前荷兰的John van der Oost 在nature 发文介绍了一种TtAgo的基因编辑效果，但是编辑效率比较低。他对TtAgo的基因编辑效率为什么低？似乎还没有找出原因。国内韩春雨老师发现提高NgAgo基因编辑系统效率的实验诀窍之一是需要保证NgAgo在表达后立即与gDNA结合，并且设计了导入gDNA的时间梯度为首次导入后, 分别在8，12，24 hr再次导入gDNA, 以提高gDNA的装载效率。那么，A: 为了提高NgAgo的编辑效率，怎么确定NgAgo的表达时间非常关键。B: 同时，NgAgo和gDNA是否偶联作用于DNA可能是确定NgAgo有没有DNA编辑效果的关键之一，也是提高NgAgo基因编辑效率的关键之一，因此，本文设计了一个简单的实验系统以解决这两个问题，本文提出一个可视化检测NgAgo基因编辑过程的一个初步设想。

        材料：1. 红色荧光标记的gDNA（或者其它高检测灵敏度的标记）

            2. NgAgo蛋白基因与GFP基因融合

      方法：用高检测灵敏度的显微镜观察gDNA和NgAgo-GFP的共定位情况。

结果:

    1.如果观察到绿色荧光蛋白开始表达，则可能表明NgAgo蛋白开始表达了,可以用流式细胞仪分选GFP阳性细胞（同步化），以提高基因编辑效率。

     2.如果观察到gDNA和NgAgo-GFP（红色荧光、绿色荧光）的共定位成像，则表明：

      A.gDNA和NgAgo-GFP有可能结合上了，这是NgAgo基因编辑系统起作用的首要条件。

     B.如果gDNA和NgAgo-GFP是在细胞核共定位的，则NgAgo基因编辑系统的作用部位有可能为核基因组。

    最重要的一点是这个简单的检测系统有可能找出NgAgo系统基因编辑效率低下的原因，比如gDNA和NgAgo蛋白没结合上（两者没有共定位）、gDNA和NgAgo蛋白没有被运输到细胞核（两者没有在细胞核共定位）。

   那么怎么确定此NgAgo基因编辑系统结合到核基因组呢，如果细胞核共定位的荧光的位置是固定的，则表明有可能结合上了，反之，如果共定位的荧光是流动的，则可能没有结合上，也就谈不上基因编辑。

                 示意图（红点为gDNA,绿点为NgAgo-GFP,紫色双链为DNA链）

    本文完成比较草率，是一个粗糙的检测系统，错误在所难免(比如标记后的gDNA是否会影响与NgAgo的结合等等），欢迎大家批评指正。