蛋白质样本制备是蛋白相关实验的起点，Western Blot、总蛋白定量、部分蛋白修饰检测都需要先将细胞内蛋白充分释放到液相体系。裂解液配方直接决定蛋白抽提效率，尤其是膜蛋白、细胞骨架蛋白、核蛋白这类难溶性蛋白，普通温和裂解体系很难实现充分溶解。RIPA 裂解液（RIPA Lysis Buffer，Strong，AbMole，M124584）是分子生物学中广泛使用的总蛋白提取试剂，特殊去污剂组合可以高效裂解细胞，充分溶解胞浆、细胞膜以及细胞核来源蛋白，获得高产量总蛋白样本，为下游蛋白定量与免疫印迹实验打下基础。

一、什么是 RIPA 裂解液（强）

RIPA 裂解液（强）（RIPA Lysis Buffer，Strong，AbMole，M124584）是一种含有多种去污剂的复合裂解缓冲液，主要成分为：50 mM Tris (pH 7.4)，150 mM NaCl，1% Triton X-100，1% 脱氧胆酸钠，0.1% SDS，原钒酸钠，EDTA等。体系同时搭配非离子去污剂、阴离子去污剂，兼顾裂解能力与缓冲稳态；Tris-HCl 维持体系 pH 稳定；氯化钠维持生理离子强度；EDTA 螯合二价金属离子，抑制部分金属依赖性蛋白酶活性；原钒酸钠作为磷酸酶抑制剂，抑制部分酪氨酸磷酸酶，保护蛋白磷酸化修饰。该产品为即用型裂解缓冲液，实验前按需补加蛋白酶抑制剂Cocktail（AbMole，M5293），磷酸酶抑制剂Cocktail（AbMole，M7528）或去乙酰化酶抑制剂Cocktail（AbMole，M13406）即可投入使用。

图 1. RIPA 裂解液（强）的主要配方及其裂解细胞的示意图

二、科研实验中为什么需要 RIPA 裂解液（强）

自行配制 RIPA 裂解液存在不少难点，脱氧胆酸钠在酸性环境下容易析出，SDS 低温条件下也会发生沉淀；各组分称量、pH 校准、过滤除菌等步骤多，容易出现批次间差异，直接影响蛋白抽提效率。AbMole的RIPA 裂解液（RIPA Lysis Buffer，Strong，AbMole，M124584）各组分配比、pH 已经完成校准，开瓶即可使用，减少配液带来的人为误差。和温和裂解缓冲液对比，强 RIPA 裂解液拥有更强的蛋白溶解能力，针对膜受体、骨架蛋白、转录因子等难溶蛋白抽提效果更好，适合 WB、蛋白定量、蛋白修饰检测。

三、RIPA 裂解液（强）的主要科研应用场景

1. Western Blot 样本制备：贴壁细胞、悬浮细胞、动物组织样本总蛋白提取，是 WB 最常用样本制备试剂。

2. 蛋白定量检测：提取总蛋白后用于 BCA、Bradford 蛋白浓度测定。

3. 蛋白翻译后修饰检测：磷酸化、泛素化等修饰蛋白的样本制备（需要配套补加完整蛋白酶、磷酸酶抑制剂）。

4. 难溶性蛋白抽提：膜蛋白、细胞骨架蛋白、核蛋白（组蛋白、转录因子）的提取。

四、操作说明（仅供参考）

1. 裂解细胞样品1.1 取适当量的裂解液，如有需要，在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail（M5293），磷酸酶抑制剂Cocktail（M7528）或去乙酰化酶抑制剂Cocktail (M13406)，具体操作可参考相关产品说明书。准备好置于冰上备用。

1.2 贴壁细胞：去除培养液，用预冷的 PBS、生理盐水或无血清培养液洗 2 遍 (洗去血清中 IgG 干扰对 IP 和 Co-IP 实验是有益的，但对 WB 可能并非必要)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 μL 裂解液的比例加入预冷的裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。冰上放置 5-10 分钟，期间剧烈震荡 3-4 次，每次 30 秒，以充分裂解。

1.3 悬浮细胞：离心收集细胞，弃上清，用预冷的 PBS、生理盐水或无血清培养液洗 2 遍 (洗去血清中 IgG 干扰对 IP 和 Co-IP 实验是有益的，但对 WB 可能并非必要)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 μL 裂解液的比例加入预冷的裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必须分装成 0.5-5 × 10⁶ cells/管，然后再裂解。冰上放置 5-10 分钟，期间剧烈震荡 3-4 次，每次 30 秒，以充分裂解。充分裂解后，14,000 g 低温离心5 分钟，取上清，即可进行后续的WB、IP 等操作。也可用液氮速冻后放 –80°C 长期保存。

注：一般每 0.5-5 × 10⁶ 细胞用 1 mL 的 RIPA 裂解液裂解。细胞数量较高时，可加大裂解液用量 

2. 裂解组织样品

2.1 取适当量的裂解液，如有需要，在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail（AbMole，M5293），磷酸酶抑制剂Cocktail（AbMole，M7528）或去乙酰化酶抑制剂Cocktail（AbMole，M13406），具体操作可参考相关产品说明书。准备好置于冰上备用。

2.2 将组织置于小皿中，冰上操作，剪切成细小的碎片。

2.3 按照每 20 mg 组织加入 150-250 μL 裂解液的比例加入预冷的裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。

2.4 用玻璃匀浆器冰上均质 30-50 次，或超声破碎细胞，每次 30 秒，3-4 次，每次间隔 1 分钟，置于冰上冷却。均质或超声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于 90%，同时组织已经完全裂解，没有明显的小组织块。2.5 将匀浆物转移到离心管，冰上放置 5-10 分钟，期间剧烈震荡 3-4 次，每次 30 秒，以充分裂解。充分裂解后，14,000 g 低温离心 5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、WB 和免疫沉淀等操作。注：每 20 mg 冻存的小鼠肝脏组织用200 μL 本裂解液裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为 15-25 mg/mL，不同状态的不同组织有所不同。

五、重要注意事项

1. 裂解全程建议冰上操作，抑制蛋白酶活性，避免蛋白降解；蛋白酶抑制剂必须裂解前新鲜添加。

2. 该裂解液含有 SDS，低温环境会出现析出，使用前观察，若出现沉淀，温水浴复溶混匀后再使用。

3. 本产品去污剂强度高，不适用于酶活性检测相关。

4. 本产品仅用于科学研究。

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