摘要：NP-40 Lysis Buffer Pro（AbMole，M124457）是一种温和型细胞/组织裂解液，以非离子去垢剂 NP-40 为主要成分。该产品在有效裂解细胞膜的同时，能够较大程度保持蛋白质的天然构象及蛋白质间的相互作用。经其裂解得到的蛋白样品兼容 PAGE、Western blot、免疫沉淀（IP）、共免疫沉淀（co-IP）与 ELISA 等多种下游实验，可用于动物与植物来源的细胞及组织样本。

一、什么是 NP-40 Lysis Buffer Pro

NP-40 Lysis Buffer Pro（AbMole，M124457）是一种预混的即用型裂解液，核心成分为非离子去垢剂 NP-40。NP-40 可在低于临界胶束浓度时插入细胞膜磷脂双分子层，温和溶解膜结构，对蛋白质空间构象与蛋白复合物的非共价结合干扰较小。与含 SDS、脱氧胆酸钠的强裂解液相比，NP-40 裂解液更适合需要保留蛋白天然状态与相互作用的实验。该产品将缓冲体系、盐浓度与 NP-40 比例预先优化，开封即用，省去了自行配制时反复调节 pH 与离子强度的工作。

二、为什么需要温和的裂解体系

蛋白相互作用研究对裂解条件较为敏感。裂解强度不足会导致蛋白得率低、背景高；裂解强度过大则会破坏蛋白复合物，使免疫共沉淀得不到预期结果。以 RIPA 为代表的强裂解液含有离子型去垢剂，提取效率较高，但会拆散多数非共价结合的蛋白复合物，并可能影响抗体与抗原的识别。用其制备的样品适合常规 Western blot，但不适合用于分析蛋白相互作用。当研究目标是蛋白复合物、翻译后修饰状态或酶活性时，裂解条件需要控制在温和范围。NP-40（AbMole，M124457）裂解液在这类实验中是常用的前处理选择。

三、主要应用场景

1. 免疫沉淀与共免疫沉淀：温和裂解条件有利于保留内源蛋白复合物，是验证蛋白相互作用的常用起点；

2. Western blot 与 SDS-PAGE：温和裂解得到的膜蛋白与胞质蛋白谱较完整，条带背景较低；

3. ELISA 与蛋白定量

4. 酶活与激酶检测：天然构象得到保留，酶活检测结果更接近真实状态；

5. 翻译后修饰分析：温和条件可减少裂解过程中修饰的丢失（仍需添加相应抑制剂）。

四、使用方法参考

细胞样品处理步骤

1. 配制NP-40裂解液（AbMole，M124457）的工作液：取适量裂解液，在使用前加入PMSF(AbMole，M2952)，使其终浓度为1 mM。也可根据实验需要选择添加相应的蛋白酶抑制剂(AbMole，M5293) 和/或磷酸酶抑制剂(AbMole，M7528) 。 

2. 细胞收集：如为贴壁细胞，则吸弃培养液，使用预冷的PBS、生理盐水或无血清培养液轻柔漂洗一次（若血清蛋白无干扰可省略）。按6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解工作液，均匀覆盖细胞表面，并于冰上静置5 min，使裂解液充分渗透，随后用移液器轻柔吹打数次，将裂解物收集至离心管中。

如为悬浮细胞，则离心收集细胞，轻轻vortex或者弹击管底以把细胞尽量分散开。按照6孔板每孔细胞加入 150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。轻弹管底以充分裂解细胞。如果细胞量较多，需分装成0.5-1×106个细胞/管，然后再裂解。

3. 裂解后处理：充分裂解后，4℃、14000 rpm离心5 min，取上清，即可进行后续的 PAGE、WB和IP等操作。

建议：每100万个动物细胞使用100 μL裂解液，预期蛋白浓度约为2-4 mg/mL（实际浓度因细胞类型而异）。通常6孔板每孔加入150 μL裂解液即可满足需求，但细胞密度较高时，为保证裂解效果，建议将用量增加至200-250 μL。

组织样品处理步骤

1. 配制NP-40裂解液（AbMole，M124457）的工作液：取适量裂解液，在使用前加入PMSF，使其终浓度为1 mM。也可根据实验需要选择添加相应的蛋白酶抑制剂(AbMole，M5293) 和/或磷酸酶抑制剂(AbMole，M7528) 。 

2. 组织处理：将组织剪切成细小的碎片，按照每 20 mg组织加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液；如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量）。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。也可先将组织在液氮中冷冻研磨成粉末，再加入裂解液，冰上裂解10-20 min，为提升裂解效率，建议延长至20 min。

3. 裂解后处理：充分裂解后，4℃、14000 rpm 离心5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、WB 和IP等操作。

总结

综上，NP-40 Lysis Buffer Pro 以温和裂解为主要特点，适用于蛋白相互作用、修饰分析与常规蛋白检测等多种实验的前处理。预混即用设计简化了操作流程，也减少了自配批次间的差异。

*本文所述均为科研试剂，仅供科学研究参考

参考文献

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[2] Sambrook J, Russell D W. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 3rd ed. Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001.

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