重组 Neurolysin 蛋白（Recombinant Human Neurolysin Protein，AbMole，M45322）是研究神经肽代谢与肽酶生物学的重要工具蛋白。Neurolysin（Nln，又称寡肽酶 M、可溶性血管紧张素 II 结合蛋白，EC 3.4.24.16）属于 M3 家族锌金属肽酶，与 Thimet 寡肽酶（THOP1）高度同源，能够以 His-Glu-X-X-His 锌结合基序催化水解 17 个氨基酸以内的寡肽底物。该蛋白存在两种亚细胞定位形式：含 N 端线粒体导肽的长形式定位于线粒体，短形式存在于胞质；重组表达的去导肽形式保留了完整催化结构域，可用于体外酶学与底物谱分析。

分子层面，Neurolysin 的底物谱覆盖多条神经肽与血管活性肽通路。Neurolysin 可高效灭活缓激肽、P 物质、神经降压素、血管紧张素 II 与血加压素等具有神经毒性或促炎作用的肽段，同时催化生成血管紧张素-(1-7）、Met-/Leu-脑啡肽等具有保护作用的产物，因此在神经血管稳态调控中扮演双向闸门角色。此外，重组 Neurolysin 蛋白（AbMole，M45322）配合荧光淬灭底物（如 Mca-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Lys(Dnp)）可建立灵敏的连续酶活检测体系，用于测定酶动力学参数、筛选肽酶激活剂或抑制剂，以及比较不同底物肽的转换效率，是解析该酶催化机制的标准化工具。

在细胞实验中，重组 Neurolysin 蛋白（AbMole，M45322）可用于神经细胞与脑血管细胞的肽代谢功能研究。在原代皮层神经元氧糖剥夺（OGD）模型中，神经降压素、缓激肽等底物肽的累积会加重神经元死亡，外源补充具有催化活性的 Neurolysin 可加速培养体系中底物肽的清除，为验证底物肽毒性提供直接证据。在原代神经元中转导携带全长 Nln 的腺相关病毒（AAV2/5-CAG-Nln）可实现该酶的过表达，结合重组蛋白酶活检测可确认转导产物的催化活性。此外，该重组蛋白也适用于神经元－星形胶质细胞共培养体系，用于解析细胞间神经肽信号的灭活路径。

Neurolysin 的体内功能研究以脑缺血模型为代表。在大脑中动脉栓塞（MCAO）小鼠模型中，缺血再灌注 24 h 后缺血侧脑组织膜结合型 Nln 水平上调约 2 倍，并可持续至少 1 周，提示其是脑缺血后的内源性代偿保护机制。功能验证采用双向策略：缺血后 1 h 给予特异性 Nln 抑制剂 Agaricoglyceride A，可剂量依赖性加重脑梗死与脑水肿、破坏血脑屏障并升高 IL-6、MCP-1 水平，同时伴随缓激肽、神经降压素、P 物质在缺血半球的累积；反之，经 AAV2/5-CAG-Nln 在小鼠脑内过表达 Nln 两周后再行 MCAO，底物肽水平下降，动物获得显著的脑保护效应。重组 Neurolysin 蛋白（AbMole，M45322）为上述体内研究提供了酶学验证与标准品支撑。重组 Neurolysin 蛋白（AbMole，M45322）还为外周循环多肽的代谢研究提供了工具。有文献选用 8‑10 周龄雌性小鼠，将去内毒素重组 Neurolysin 按照 2 mg/kg、10 mg/kg 剂量进行腹腔注射。蛋白入血之后以完整、具备酶催化活性的形式存在于循环血液，血药达峰时间 Tmax 为 1 h，血液中半衰期约 30 min。在该给药剂量下，小鼠的动脉血压、心率、体温以及血糖水平均未观测到明显改变，蛋白制剂不会引发急性生理扰动。动物血液多肽组检测结果表明：循环中神经降压素、缓激肽等 Neurolysin 敏感底物多肽丰度发生显著下降，直接证实该重组蛋白在体内同样保有多肽水解活性。

综上，重组人 Neurolysin 蛋白（AbMole，M45322）作为M3 家族锌金属肽酶工具，既可服务于体外酶动力学与底物谱解析，也为神经肽代谢、脑缺血内源性保护机制研究提供了蛋白试剂。Neurolysin 同时调控多条神经肽通路的独特属性，使其成为探索多靶点神经保护策略的重要研究对象。

* 本文所述均为科研试剂，仅供科学研究参考

[1] Serizawa A, et al. Cloning and functional expression of human soluble angiotensin II-binding protein. Journal of Biological Chemistry, 1995, 270: 2092.

[2] Jayaraman A, et al. Peptidase neurolysin functions to preserve the brain after ischemic stroke in male mice. Journal of Neurochemistry, 2020, 153(1): 120-137.

[3] Karamyan V T. The role of peptidase neurolysin in neuroprotection and neural repair after stroke. Neural Regeneration Research, 2021, 16(10): 2019-2025.

[4] Norman M U, et al. Substrate specificity and localization of neurolysin in the cardiovascular system. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology, 2003, 284: H1978.

[5] Shrimpton C N, et al. Soluble metalloendopeptidases and neuroendocrine signaling. Endocrine Reviews, 2002, 23(5): 647-664.

细胞实验参考

细胞系：Human iPSC-derived brain microvascular endothelial cells (CTR90F, CTR65M lines)

方法：Cells were seeded on collagen-coated transwell inserts and cultured to form confluent barrier monolayers; recombinant neurolysin was added to the apical culture medium either directly or after 1 h pre-incubation with bradykinin, neurotensin or substance P; barrier function was assessed by transendothelial electrical resistance (TEER) measurement and paracellular fluorescein permeability assay

浓度：0.1, 0.5, 1 μg/mL

处理时间：24 h for direct cell exposure; 1 h pre-incubation with peptide substrates, followed by 24 h cell treatment

参考文献：Fluids Barriers CNS. 2021 Jan 19;18 (1):12

上述方法来自公开文献，仅供相同目的实验参考。如实验目的、材料、方法不同，请参考其他文献。

动物实验参考

动物模型：Male CD-1 mice, adult (25–30 g body weight), healthy physiological model

配制：Recombinant neurolysin dissolved in sterile 0.9% sodium chloride solution for intraperitoneal injection

剂量：2, 10 mg/kg

给药处理：Single bolus intraperitoneal injection; serial blood samples were collected at 0.25, 0.5, 1, 2, 4 h post-administration for pharmacokinetic analysis; arterial blood pressure, heart rate, body temperature and blood glucose levels were monitored for 4 h after dosing

参考文献：J Biotechnol. 2016 Oct 10;234:105-115

上述方法来自公开文献，仅供相同目的实验参考。如实验目的、材料、方法不同，请参考其他文献。

体内实验的工作液，建议现用现配，当天使用；如在配制过程中出现沉淀、析出现象，可以通过超声和（或）加热的方式助溶。切勿一次性将产品全部溶解。

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