猪伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的一种重要动物传染病，不仅给全球养猪业造成重大经济损失，还存在感染人并引发脑炎的人兽共患风险。近年来，新型PRV变异株的出现降低了传统疫苗的保护效果，因此建立快速、简便的现场检测方法对防控该病具有重要意义。

近期，吉林大学动物医学学院王化磊教授/张海丽教授团队完成的题为“A one-pot RAA-CRISPR/Cas12a assay for the visual detection of Pseudorabies virus”的研究在Journal of Integrative Agriculture（《农业科学学报（英文）》，JIA）优先上线发表。

本研究将重组酶辅助扩增（RAA）与CRISPR/Cas12a系统相结合，针对PRV的gE基因设计特异性引物与crRNA，建立了一管法核酸检测体系，并优化了反应条件，评价了该方法的灵敏度、特异性及临床样本检测一致性。

结果显示，所建立的RAA-CRISPR/Cas12a方法可在50分钟内完成检测，对重组质粒的检测限为5拷贝/μL，对PRV病毒的检测限为7.96×10-2 TCID50/反应；该方法与猪瘟病毒（CSFV）、非洲猪瘟病毒（ASFV）、猪丁型冠状病毒（PDCoV）等其他常见猪病原体均无交叉反应，表现出高度特异性；在临床样本验证中，本方法与实时定量聚合酶链式反应（qPCR）检测结果完全一致，具有良好的临床符合性。

综上所述，本研究成功建立了一种基于RAA与CRISPR/Cas12a系统的PRV核酸检测方法，具有快速、灵敏、特异、操作简便等优点，适用于资源有限条件下的现场检测，为PR的临床诊断提供了有力工具。

吉林大学动物医学学院本科生李博一、博士研究生赵俊杰为论文第一作者，张海丽教授为通讯作者。本研究获得“十四五”国家重点研发计划青年科学家项目“实验动物病原快速检测新技术研究”（2021YFF0703600）、吉林省科技发展计划项目（20250202061NC）资助。

Cite the article:

Boyi Li, Junjie Zhao, Luyao Liu, Ziyang Han, Zimo Zhang, Yuxin Zhang, Qinghui Qi, Hualei Wang, Hongli Jin, Pei Huang, Haili Zhang. 2026. A one-pot RAA-CRISPR/Cas12a assay for the visual detection of Pseudorabies virus. Journal of Integrative Agriculture, Doi:10.1016/j.jia.2026.04.027

https://doi.org/10.1016/j.jia.2026.04.027

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