孢子丝菌病，是由孢子丝菌复合体引起的皮肤、皮下组织及淋巴系统的慢性感染，在南美洲和我国东北地区都算高发。在我国，致病菌种是球形孢子丝菌（Sporothrixglobosa）。

它的首选药是伊曲康唑。但这几年陆续有伊曲康唑治疗失败、甚至耐药的病例报道。问题随之而来：这个耐药株，在病人体内会不会更"凶"？毒力有没有增强？用伊曲康唑到底还有没有效？

要回答这个问题，过去我们习惯用小鼠、大鼠——成本高、周期长。所以这次我们换了个新伙伴：大蜡螟。

一、为什么是大蜡螟？

大蜡螟（Galleriamellonella）是鳞翅目螟蛾科的一种昆虫，幼虫阶段的固有免疫特点与哺乳动物相似。它的优点很实在：

1、便宜、好繁殖、生长周期短，可以高密度饲养；

2、体积相对大，操作方便；

3、有许多与人类同源的免疫基因产物；

4、不受动物伦理限制。

这套模型已经被用于念珠菌、烟曲霉、副球孢子菌、组织胞浆菌，以及申克孢子丝菌、巴西孢子丝菌的毒力和药物评价。但球形孢子丝菌的大蜡螟感染模型，此前还没有人建起来。

这正是本研究的起点。

二、模型怎么建、实验怎么做的

菌株两株：

按CLSIM38-A2方案做体外药敏，两株菌的MIC相差8倍，耐药/敏感的身份很清楚。

感染模型：用微量注射器把10μL、浓度1×10⁶/mL的菌悬液，从幼虫左下腹后足打进去，37℃观察12天，记录体表颜色、刺激反馈和存活情况。

毒力评价：设1×10²、1×10³、1×10⁴ cells/larva三个剂量组，每组10只。

药物敏感性评价：感染后1小时，按20mg/kg和40mg/kg两个剂量向幼虫体内注射伊曲康唑，观察12天存活率，并在48小时做菌落计数。

模型建得成不成功？先看外观和病理：

接种后第1天，接种部位及周围就出现黑斑并逐渐扩大，4天内所有感染幼虫全身变黑、对外界刺激反应迟钝；96小时的组织切片里，消化道内可见真菌细胞成团散在分布、管腔结构遭到破坏——模型建立成功。

三、结果：耐药株"没更毒"，但"确实更耐药"

1.毒力：两株几乎一模一样

各剂量组的生存曲线放在一起看：

关键数据：

· 1×10² cells/larva组：两组生存率与空白对照组相比都无明显差异，两组之间也无差异；

· 1×10³ cells/larva组：观察终点12天时，SUMS0381（耐药）与CBS120340（敏感）的致死率都是50%；

· 1×10⁴ cells/larva组：两株菌都在第3天达到100%死亡率。

统计口径上，所有对应剂量组的生存曲线比较，P值均无统计学意义。

结论很明确：这个耐药株的毒力，和敏感株没有差别。

一个细节：低浓度（1×10²cells/larva）感染时，部分幼虫虽然被感染，存活天数和未感染的差不多——说明大蜡螟对低剂量S.globosa能产生免疫应答。

这也提示我们，幼虫体表黑化程度也许能作为一个可量化的指标，去关联真菌毒力和载菌量，这是下一步要做的事。

2.药物敏感性：两株都受益，但敏感株获益更多

注射伊曲康唑后的存活改善率和48小时菌落计数，整理如下：

读这张表有两个层面：

第一层（看生存率）：两个剂量下，耐药株组和敏感株组的生存改善都没有统计学差异——也就是说，伊曲康唑对两株菌都有保护作用，组间看起来"差不多"。

第二层（看菌落计数）：敏感株的载菌量下降幅度明显更大，差异极其显著（P<0.001）。

这种"生存率不显著、载菌量显著"的组合，指向的结论是：耐药株对伊曲康唑的敏感性低于敏感株，但还没有低到让药物完全失效。这与体外药敏结果（MIC8vs1μg/mL）的方向是一致的。

四、这项研究的意义

有三点收获：

1.首次建立了球形孢子丝菌的大蜡螟感染模型，并证实其能用于该菌的毒力评价；

2.耐药没有换来毒力增强——这点在临床上有安慰意义，耐药株并非"更难缠"；

3.大蜡螟幼虫可以作为一个体内模型，去评估S.globosa对伊曲康唑的敏感性，结果与体外药敏吻合。

清局限：受样本量限制，本研究只设了两个药物浓度组，没能进一步算出耐药株在大蜡螟体内的具体耐药值；此外，伊曲康唑在大蜡螟体内的代谢途径、如何发挥抗真菌活性，也还需要后续研究。

五、给临床的提示

对伊曲康唑治疗失败的孢子丝菌病患者，别急着下"真菌变凶了"的结论——耐药和毒力并不总是绑在一起的。更值得做的，是及时做体外药敏和体内药效评估，据此调整方案，而不是单纯加量。

参考来源

张静,何泰龙,吴晓雁,等.球形孢子丝菌伊曲康唑耐药株在大蜡螟模型中的毒力和耐药性评价[J].皮肤性病诊疗学杂志,2020,27(4):217-222.DOI:10.3969/j.issn.1674-8468.2020.04.001

你可能还想问｜大蜡螟模型与唯那生物服务

Q1：除了球形孢子丝菌，其他丝状真菌也能做大蜡螟感染模型吗？

A:可以。大蜡螟对念珠菌、曲霉、孢子丝菌、组织胞浆菌等多种病原真菌都已有成熟应用。唯那生物可根据菌种特性，定制接种浓度、感染部位、观察周期和给药窗口，帮您完成从"能不能做"到"做出可发表数据"的全程搭建。

Q2：想比较耐药株和敏感株的毒力差异，大蜡螟模型能给出哪些指标？

A:常规可输出三类核心数据：一是生存曲线与致死率，用于评价整体毒力；二是血淋巴或组织载菌量，反映体内增殖能力；三是组织病理切片，观察菌丝侵袭和宿主组织损伤。对需要区分"毒力是否改变、只是耐药"的课题，这套组合尤其合适。

Q3：做抗真菌药体内初筛，伊曲康唑之外还能评哪些药？

A:可以。抗菌药、抗菌肽、噬菌体、天然产物提取物都可在大蜡螟体内进行初筛。我们会同步设置溶剂对照、空白对照和剂量梯度，输出生存率改善率、载菌量变化以及黑化/活动度等表型指标。

Q4：如果只有临床分离株，没有标准株和突变体，能直接开工吗？

A:可以。唯那生物提供标准菌株供应、野生株复苏鉴定、突变体构建与表型验证服务。临床株我们会先做形态学、分子鉴定和体外药敏，再匹配对照株设计实验，避免"菌株身份不清"影响后续解读。

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