病毒与红细胞的特异性结合是病毒学发展史上的里程碑发现，自1941年流感病毒可凝集鸡红细胞的现象被证实后，这一机制成为病毒鉴定、分型与检测的核心手段之一。其中血吸附检查（Hemadsorption, HAd） 作为经典细胞学检测方法，至今仍在病毒分离与初步鉴定中广泛应用。

一、病毒 - 红细胞相互作用

1. 关键物质：病毒血凝素与红细胞受体

多数可凝集红细胞的病毒（正黏病毒、副黏病毒、腺病毒、风疹病毒等）表面均表达血凝素（HA），这是介导病毒与红细胞结合的关键蛋白；而红细胞膜上的唾液酸糖蛋白（VRS，病毒受体物质） 是病毒识别的核心受体，其中N - 乙酰神经氨酸（NANA） 是结合的关键基团。

2. 两大核心现象

血凝（HA）：病毒直接使悬浮红细胞发生凝集，形成网状结构；

血吸附（HAd）：病毒感染宿主细胞后，将血凝素表达于宿主细胞膜表面，使红细胞特异性黏附在感染细胞单层上。

二者本质均为病毒血凝素 - 红细胞受体的特异性结合，血吸附是血凝现象在细胞培养层面的延伸，也是血吸附检查的核心原理。

二、血吸附检查（HAd）：原理、操作与应用

1. 核心原理

病毒在敏感细胞内增殖时，会将血凝素整合到宿主细胞膜表面；向感染细胞单层加入新鲜红细胞悬液，红细胞会通过血凝素与细胞膜上的受体结合，牢固黏附于感染细胞表面，显微镜下可观察到清晰的红细胞吸附灶，以此判定病毒存在。该方法尤其适用于不产生明显细胞病变（CPE）的血凝素病毒检测，弥补了细胞病变观察的短板。

2. 标准操作流程（源自经典病毒学检测方法）

细胞接种与培养

将临床待测样本接种至敏感细胞（如 Vero 细胞、MDCK 细胞、鸡胚成纤维细胞），置于 37℃培养，待病毒完成增殖、血凝素表达于细胞膜。

红细胞悬液制备

新鲜采集豚鼠、鸡、恒河猴等动物红细胞，用生理盐水洗涤 3 次，配制成 0.2%~0.5% 的红细胞悬液（不同病毒适配红细胞种类不同）。

血吸附反应

弃去细胞培养上清液，用冷平衡盐溶液轻柔洗涤细胞单层，加入足量红细胞悬液完全覆盖细胞，4℃低温孵育 15~20 分钟（低温可防止病毒神经氨酸酶介导的红细胞洗脱，保证反应稳定）。

洗涤与观察

弃去未结合的红细胞悬液，用冷缓冲液轻柔洗涤去除游离红细胞，立即在倒置显微镜下观察：

阳性：感染细胞表面布满红细胞，形成致密吸附灶；

阴性：细胞表面无红细胞黏附，红细胞均匀散落。

定量优化（血吸附斑块法）

采用半固体overlay（甲基纤维素、0.2% 琼脂）覆盖感染细胞，培养结束后去除overlay，再进行血吸附，可形成清晰的吸附斑块，用于病毒滴度定量。

4. 方法优势与局限

优势：

无需复杂仪器，仅需细胞培养室与显微镜即可开展；

特异性强，仅血凝素病毒可出现阳性反应；

可作为细胞病变不明显病毒的补充检测手段。

局限：

仅适用于表达血凝素的病毒，适用范围受限；

依赖细胞培养，检测周期长（3~7 天）；

需新鲜红细胞，操作繁琐，易受温度、pH、离子浓度影响；

灵敏度低，低病毒载量样本易出现假阴性；

结果依赖人工判读，主观性较强。

三、从经典血吸附到分子诊断：qPCR 技术的革新

传统血吸附检查（HAd）作为细胞学经典方法，在病毒检测史上发挥了重要作用，但在临床快速诊断、高通量筛查、低载量样本检测中已难以满足需求。

基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术的病毒核酸检测可实现更快更准的高通量检测，比如上海翼和生物的牛源病原体检测试剂盒，采用一步法，能同时检测《中国药典三部》中要求对新生牛血清至少检测的6种病毒检查：牛腹泻病毒（BVDV）、牛细小病毒（BPV）、牛副流感病毒3型（BPI3)、呼肠孤病毒3型（Reo-3)、牛腺病毒（BAV-3）和狂犬病病毒（Rabies）。