上世纪50年代研究人员在细胞培养中发现了支原体污染，事实上细胞培养过程中支原体污染无处不在。综合相关数据，细胞系支原体污染的平均比例为30-60%之间。细胞培养期间，建议定期进行支原体检测以防止污染。因此，迫切需要一种快速、全面的检测方法以应对支原体日常的检测需求。

支原体的检测有多种方法，传统检测方法和核酸检测方法。

药典中对支原体检测的规定和要求

《中国药典》<3301 支原体检查法>采用了培养法和指示细胞培养法(DNA染色法)，中国药典指出也可采用经国家药品检定机构认可的其他方法。

检查支原体采用支原体液体培养基和支原体半流体培养基(或支原体琼脂培养基)。培养法是用液体或者半流体培养基培养7天后次代培养转种培养21天，一共28天，观察支原体是否生长。

指示细胞培养法(DNA染色法)是将供试品接种于指示细胞中培养后，用特异荧光染料染色。如样本有支原体污染，在荧光显微镜下可见附在细胞表面的支原体DNA着色。

《欧洲药典》中<2.6.7>中指出，可通过使用特异性引物扩增测试样本中提取的核酸来检测支原体，但需要进行方法学验证。在适当的验证之后，核酸扩增技术NAT可以代替培养法和指示细胞培养法。

支原体的核酸检测方法

培养法和指示细胞培养法(DNA染色法)能很好地检测生物制品或细胞中的支原体活菌，但耗时长。翼和生物自主研发的3款支原体检测试剂盒，均采用荧光定量qPCR方法定性检测细胞或者生物制品中是否存在支原体污染，并且进行了方法学验证。

翼和生物支原体检测试剂盒，采用双色荧光qPCR(TaqMan探针法)检测支原体DNA，检测对象为细胞培养的上清液或细胞本身、血液、其他生物制品等。操作简便、快捷、方法特性符合要求。

细胞支原体检测试剂盒方法学验证

翼和生物依据欧洲药典推荐的核酸检测支原体检查法验证方案，对试剂盒的专属性、线性范围及检测限、耐用性进行了验证。结果表明，翼和生物细胞支原体检测试剂盒这三方面特性均符合要求，配合核酸提取，检测灵敏度可达到10 CFU/mL，可替代培养法，用于细胞存储库、细胞治疗用途的细胞和生物制品中的支原体污染检测，不同型号的试剂盒可用于日常检测或者放行检测。试剂盒使用时进行适用性确认即可。

适应样本类型和处理方案：

细胞培养上清、细胞悬液、血液，可用快检直扩方案

低温保存的血清、脐带血、胰酶、抗生素、未使用的 培养液等生物制品，即使存在支原体污染，一般支原体含量也较少，建议提取样本DNA后检测，可用快检试剂盒。