Molecular Evolution of an Aminotransferase Based on Substrate–Enzyme Binding Energy Analysis for Efficient Valienamine Synthesis

基于酶-底物结合能分析氨基转移酶的分子进化，用于高效合成井冈霉烯胺

来源：ACS catalysis

IF：12.350

摘要：井冈霉烯胺是活性药物和农用化学品的宝贵组成部分，因为它具有氨基环醇结构和葡萄糖苷酶抑制活性。使用糖氨基转移酶（SAT）在井冈霉烯酮上直接构建氨基手性中心以产生井冈霉烯胺，实现了严格的立体特异性;然而，由于非天然底物井冈霉烯酮在超大底物结合口袋中的不利结合构象，低转氨活性目前限制了基于SAT的井冈霉烯胺的产生。在这里，我们采用了量身定制的组合活性位点饱和度测试/迭代饱和诱变（CAST/ISM）策略来设计最近发现的SAT（RffA_Kpn），以优化大结合口袋中井冈霉烯胺的结合，从而提高转氨活性。以WecE_Eco为模板，在UniProt 数据库中检索同源序列。使用 BLAST+ 进行序列比较表明17个非冗余序列与查询序列的氨基酸一致性为>75.0%。9个在大肠杆菌BL21中以可溶性形式成功重组表达，4种酶具有井冈霉烯酮的转氨活性，其活性范围为WecE_Eco的0.66至2.28倍。来自K.pneumoniae MGH 78578（UniProt Entry：A6TGH9）的RffA_Kpn活性最高。