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Masson染色
一、实验目的
显示病变组织纤维化程度。
二、实验原理
Masson染色使胶原纤维呈蓝色(被苯胺蓝所染)或绿色(被亮绿所染),肌纤维呈红色(被酸性品红和丽春红所染),这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料先后或混合染色,则可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染,肌纤维与胞质被中等大小的阴离子染料着染,而胶原纤维则被大分子的阴离子染料着染。由此说明了红细胞对阴离子染料的渗透性最小,肌纤维与胞质次之,而胶原纤维具有最大的渗透性。I型、III型胶原呈绿色(GBM、TBM、系膜基质及肾间质呈绿色),嗜复红蛋白、肾小管胞质、红细胞呈红色。
三、实验材料和试剂:
(一)Weigert氏铁苏木素液(可用Harris苏木素代替)
甲液:
苏木素1g
无水酒精(或 95%酒精) 100ml
乙液:
30%三氯化铁水溶液 4ml
蒸馏水 95ml (30%三氯化铁溶液则为100ml)
盐酸 1ml
临用时,取甲、乙液等量混合即可使用。混合时应将乙液加人甲液内,染液呈紫黑色。
铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用,因铁与染色剂的色素化合生成不溶性沉淀,所以铁作媒染液时,必须与染液分别配制和分别保存,染片时临时混合应用。
由于这是一种铁苏木素,它将胞核染成黑色。能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用,且不会被光线褪色,因此比钾矾苏木素染色较为持久。
(二)丽春红酸性品红液
丽春红 S(Ponceau S)0.7g
酸性品红(acid fuchsin)0.3g
蒸馏水 99ml
冰醋酸(glacial acetic acid)1ml
(三) 1%磷钼酸水溶液
磷钼酸(phosphomolybdic acid)1g
蒸馏水加至 100ml
(四) 2%苯胺蓝液
苯胺蓝(aniline blue)2g
冰醋酸(glacial acetic acid ) 2ml
蒸馏水 98ml
(五)1%冰醋酸
冰醋酸 1mlL
蒸馏水99ml
(六)1%亮绿液
亮绿(light green)1g
蒸馏水 99ml
冰醋酸(glacial acetic acid ) 1ml
(七)Bouin’s液
苦味酸饱和液(1.22%)75ml
福尔马林25ml
冰醋酸5ml
此液一般在临用时配制,对皮肤及肌腱有软化作用。
四、染色步骤与方法:
1.组织固定于Bouin氏液,流水冲洗一晚,常规脱水包埋。
2.切片脱蜡至水:
(1)二甲苯中脱蜡10min×3次,用吸水纸吸干液体。
(2)100%乙醇5min×2次,用吸水纸吸干液体。
(3)95%乙醇5min×2次,用吸水纸吸干液体。
(4)流水2min,用吸水纸吸干水分。
3.Weiger氏铁苏木素染5-10min。
4.流水稍洗。
5. 0.5%盐酸酒精分化。15s
6.流水冲洗3min。
7.丽春红酸性品红液染8min。
8.蒸馏水稍冲洗。
9. 1%磷钼酸水溶液处理约5min。
10.不用水洗,直接用苯胺蓝液或亮绿液复染5min。
11.1%冰醋酸处理1min。
12.95%乙醇脱水5min×2次,用吸水纸吸干液体。
14.二甲苯中透明5min×2次,用吸水纸吸干液体。
15.中性树胶封片。
结果:胶原纤维呈蓝色(用苯胶蓝液复染)或绿色(用亮绿复染)。胞质、肌纤维和红细胞红色。胞核蓝褐色。
注意事项:
1、组织用Bouin氏液或Zenker氏液固定为佳。如已用10%甲酸液固定,切片可在脱蜡至水后.再放入Bouin氏液作用一晚或置37℃温箱内1-2小时,然后流水冲洗切片至黄色消失再进行染色。
2、铁苏木素染核(见苦味酸一酸性品红法)。
3、如没有丽春红染料,可把酸性品红加至1克来配制。
4、用1%磷钼酸处理时可在镜下控制,见肌纤维呈红色,胶原纤维呈淡红色即可。
5、苯胺蓝或亮绿不能过染,防止掩盖红色。
6、磷钼酸使绿色和蓝色鲜艳,磷钨酸增加红色。
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