Masson染色

一、实验目的

显示病变组织纤维化程度。

二、实验原理                              

Masson染色使胶原纤维呈蓝色(被苯胺蓝所染)或绿色（被亮绿所染），肌纤维呈红色(被酸性品红和丽春红所染)，这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料先后或混合染色，则可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染，肌纤维与胞质被中等大小的阴离子染料着染，而胶原纤维则被大分子的阴离子染料着染。由此说明了红细胞对阴离子染料的渗透性最小，肌纤维与胞质次之，而胶原纤维具有最大的渗透性。I型、III型胶原呈绿色（GBM、TBM、系膜基质及肾间质呈绿色），嗜复红蛋白、肾小管胞质、红细胞呈红色。

三、实验材料和试剂：                        

（一）Weigert氏铁苏木素液（可用Harris苏木素代替）

甲液：

苏木素1g

无水酒精（或 95％酒精） 100ml

乙液：

30％三氯化铁水溶液 4ml

蒸馏水 95ml （30%三氯化铁溶液则为100ml）

盐酸 1ml

临用时，取甲、乙液等量混合即可使用。混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。

铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。

由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线褪色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。

（二）丽春红酸性品红液

丽春红 S（Ponceau S）0.7g

酸性品红（acid fuchsin）0.3g

蒸馏水 99ml

冰醋酸(glacial acetic acid)1ml

（三） 1%磷钼酸水溶液

磷钼酸（phosphomolybdic acid）1g

蒸馏水加至 100ml

（四） 2%苯胺蓝液

苯胺蓝（aniline blue）2g

冰醋酸（glacial acetic acid ） 2ml

蒸馏水   98ml

（五）1%冰醋酸

冰醋酸  1mlL

蒸馏水99ml

（六）1%亮绿液

亮绿（light green）1g

蒸馏水 99ml

冰醋酸（glacial acetic acid ） 1ml

（七）Bouin’s液

苦味酸饱和液（1.22％）75ml

福尔马林25ml

冰醋酸5ml

此液一般在临用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。

四、染色步骤与方法：

1．组织固定于Bouin氏液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。

2．切片脱蜡至水：

（1）二甲苯中脱蜡10min×3次，用吸水纸吸干液体。

（2）100%乙醇5min×2次，用吸水纸吸干液体。

（3）95%乙醇5min×2次，用吸水纸吸干液体。

（4）流水2min，用吸水纸吸干水分。

3．Weiger氏铁苏木素染5-10min。

4．流水稍洗。

5． 0.5%盐酸酒精分化。15s

6．流水冲洗3min。

7．丽春红酸性品红液染8min。

8．蒸馏水稍冲洗。

9． 1%磷钼酸水溶液处理约5min。

10．不用水洗，直接用苯胺蓝液或亮绿液复染5min。

11．1%冰醋酸处理1min。

12．95%乙醇脱水5min×2次，用吸水纸吸干液体。

13．100%乙醇5min×2次，用吸水纸吸干液体。

14．二甲苯中透明5min×2次，用吸水纸吸干液体。

15.中性树胶封片。

结果：胶原纤维呈蓝色(用苯胶蓝液复染)或绿色(用亮绿复染)。胞质、肌纤维和红细胞红色。胞核蓝褐色。

注意事项:

1、组织用Bouin氏液或Zenker氏液固定为佳。如已用10%甲酸液固定,切片可在脱蜡至水后.再放入Bouin氏液作用一晚或置37℃温箱内1-2小时,然后流水冲洗切片至黄色消失再进行染色。

2、铁苏木素染核(见苦味酸一酸性品红法)。

3、如没有丽春红染料,可把酸性品红加至1克来配制。

4、用1%磷钼酸处理时可在镜下控制，见肌纤维呈红色,胶原纤维呈淡红色即可。

5、苯胺蓝或亮绿不能过染，防止掩盖红色。

6、磷钼酸使绿色和蓝色鲜艳，磷钨酸增加红色。