昨晚一个朋友打电话过来，说到怎么也检测不出来有目的蛋白表达。我回道有的时候表达与否和蛋白本身、载体、原核还是真核表达体系等都有关系，具体原因需要摸一摸才能知道。

这个电话使我想起了在国外做博后期间的感悟。老板交代给我的蛋白之前一直都是用从包涵体里复性的办法纯化的，得率非常低，远不能满足我的实验要求。那个时候我几乎每天都在纯化，这样做了半年，仍然没有拿到稳定的蛋白，老板并不大询问我的实验进度，偶尔问起，知道无进展后也只是回一个“a tough work， eh”，并不催我，这使我能沉下心继续埋头纯化。事实上，看似是简单的重复其实已使我对该蛋白有了一些了解：例如它是可溶性表达，只不过很快就会变性沉淀掉，我尽量快速纯化，但一洗脱下来还会马上沉淀，这时加入大量Arg大部分会再度溶解。后来鉴于蛋白本身的不稳定特性，我又做了一些对活性等影响不大的突变等修饰，最后突变蛋白的表达很不错。不过当我两次纯化之间间隔得时间比较长时，就发现，第二次纯化的得率经常非常低，而第二天我再培养表达一次，同前一次条件完全一样，却发现得率正常了。这样的情况我碰见了好几次，觉得相当奇怪，后来突然感觉它就像是一个“naughty boy”看我很久不理他，就会跟我闹脾气（少表达一些），等我“哄”过了就又高兴的正常了。有次，我将这个体系送给了另一个需要该蛋白的实验室，结果回信过来说，没有测得任何表达，无奈就从我这里直接拿了蛋白用。我想，这是naught  boy在闹脾气呢：突然到了一个陌生的环境，一个也不认识，所以就“一句话”都不说了。呵呵。

这个事情使我感觉到，我们的实验对象并不是死的，它就像一个内向的小孩，需要我们细致、耐心、周到的去交流，要和它去做朋友，这样你才会越来越了解这个朋友，它也会“愿意”向你敞开心扉。所以，遇到问题要耐心，哪怕你认为已经分析了所有的可能，不要放弃，也许我们的朋友只是再需要多一点点的时间来鼓足勇气向你开口。