挑选 6 个代表性的化合物进行体内抗炎效果的评价。选用气道嗜酸细胞增多症的过敏性哮*小鼠模型，每种化合物（300 nmol／kg，10% pBs/CDX）通过鼻腔途径给药，测试结果如图 3 所示。化合物 6 虽然溶解度较差，但其产生了一定的效果，减少了 36% 嗜酸性粒细胞的渗入，与化合物 1 相当。而化合物 45, 65和67 没有产生效果，因此后续将不对这三个化合物进行研究。有意思的是，化合物 50和 57在体外与它们具有相似的活性，但在体内却拥有较好的活性，分别减少了 39% 和 48% 嗜酸性粒细胞的渗入（图3A）。最后挑选化合物 57 作为先导化合物进行研究，化合物 57 在该模型中的体内 IC₅₀ 为 310 nmol/kg，而化合物 1 由于溶解度较差，因此其 IC₅₀ 大于 500 nmol/kg（图3B）。

图3. 化合物对气道嗜酸细胞增多症的过敏性哮*小鼠模型体内抗炎活性的评价

    鉴于化合物 57 是一个含有嘧啶酮结构的全新分子，又进一步进行了三方面的评价：（1）嘧啶酮结构的 Michael 加成受体反应活性；（2）与 CXCL12 的结合活性；（3）对其它趋化因子的选择性。化合物 57 和 1 的 Michael 加成受体反应活性采用加入 GSH 的方式进行评价，LC-MS 分析显示化合物 57 的反应活性明显低于 1。结合力实验测试表明，化合物 57 与 CXCL12 的解离平衡常数（Kd）为 780 nM，与之前采用 FRET 实验测得的 K_i 值（267 nM）在同一数量级。选择性评价（图5）显示，化合物 1 和 57 对其它趋化因子均具有较好的选择性。

图4.化合物 57 和 68 的结构及其活性测试

图5. 化合物的选择性测试

小M 的小思考：

      趋化因子及其受体因特殊的生物学功能，使之成为潜在的药物靶点。其中CXCL12/CXCR4 生物轴尤其重要，广泛参与了炎症、肿瘤、病毒感染、心血管等多种病理过程。采用小分子拮抗剂或者单克隆抗体阻断这一相互作用可用于多种疾病的治疗。虽然基于阻断 CXCL12/CXCR4 相互作用的小分子拮抗剂有很多，但大部分研究均集中于 CXCR4 受体上。因此， Regenass,P.等作者从一个全新的角度出发，通过针对 CXCL12 去寻找小分子拮抗剂，最终发现了化合物 LIT-927 可以阻断 CXCL12 与 CXCR4 的结合，并且是首个在气道嗜酸细胞增多症的过敏性哮*小鼠模型中具有口服效力的药物，未来具有应用于治疗炎症疾病的潜力。

参考文献

[1] Koenen,R. R.，et al. Therapeutic targeting of chemokine interactions inatherosclerosis. Nat. Rev. Drug Discovery 2010, 9, 141−153;

[2] Regenass,P.; Bonnet, D. et al. Discovery of a Locally and Orally Active CXCL12Neutraligand (LIT-927) with Anti-inflammatory Effect in a Murine Model ofAllergic Airway Hypereosinophilia. J MedChem. 2018

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