滋养层使用梯度参考

1：培养天数梯度（正常增殖规律约等于同等密度）：这类好养常见系，一般一两周就可调整到正常增殖状态，取大约同等量细胞，分别取一天，两天，三天上清收集，无菌操作，量大可做浓缩，无菌处理。其他更多天数后期细胞毒性会增加，可做上清回输比较实验，看下增殖效果，5天以上收取上清的，涉及培养体系营养耗尽验证，其他培养目的如，蛋白生产，病毒生产等特殊目的可讨论培养体系验证。

2：上清梯度：不同比例上清回输，有无浓缩，同理应用，建议按10%,25%,40%回输比较增殖

3：上清保存效价梯度：平时简单实验两周内用完，保存四度，长期保存负20-负80，技术老师可做半年，一年，两年验证。评价上清长期保存效果。这部份是我司统计重点，有效果老师也可告知我司，我们做相关统计。

4:   参考文献与经验谈：THLE-3株历史介绍有关于自体上清回输培养相关专利，类器官培养法-上清回输很多大厂家用法，难养系我司统计较多，肝，乳腺，胰岛胰腺，免疫类，泌尿类都建议用户老师保存一份复苏初代上清辅助备份方案。

5：涉及自动化开发用户组，可深入讨论，转染，培养，冻存复苏。

6：重组抗体，蛋白生产科研，工业研发组可合作上游工艺开发与技术人员储备。

注：需要该类细胞免费试用要求，进口耗材试剂，后期长期研发合作,三年以上相关培养经验。成纤维、免疫类，生殖类、二倍体.

离体后处理与培养，普通培养体系也可很顺利培养，增殖速度上会慢些，正常组织细胞会很顺利增殖，癌部份增殖较慢，建系目的细胞如用流式，或单细胞测序等方法，建议先简易单克隆保种后，分出多余细胞做鉴定，种子目的细胞不要有化学力，机械力等实验损伤。需简易单克隆组-邮件联系

种子细胞鉴定后细胞增殖驯化，建议用平时筛选较严格培养体系，通过驯化与简易单克隆方式，反复优化驯化培养，提高增殖速度，虽然也费时，目的结果可控。

污染后救助建议ATCC方法，一周左右防止去除，国内合作库案例推荐。

转染与感染：建系需高滴度蛋白与病毒，可讨论细工工具细胞应用参考，低毒转染试剂开发可讨论-细工开发自动化转染冗余试剂部份。

冻存复苏-细工这部分总结敏感冻存复苏案例较多，原代冻存复苏相关试剂与技术方法一致在统计中，临检样本库-PBMC,单细胞测序用户组已有多年合作与案例应用，临检组原代细胞培养更多统计与试剂、技术方案国内体系备份组也在进行中，有需案例验证预实验组，可先讨论细工方案可行性。

注：离体培养与建系后驯化分开看，细工结合售后统计资料，经验等，给出简易可行救助方案。

今年协助用户解决培养问题，已有三株，舌癌-BICR3，子宫异位上皮-hEM15A-12Z，胆管癌-ICC-X1，由国内正规库与公司来源，就这三株国内建系培养特点列出三个参考内容。

培养试剂与方法几个要点

冻存复苏是挺关键的，也建议课题组实验室完成DMSO种子库备份组，新型冻存液有需要我司统计内容（可留言，后面继续讨论应用相关技术），

胰酶：膜无损相关技术储备很必要，建系不易。

胎牛：平时只要涉及血清相关问题，最好多找几家，不同批次验证并储备些，即便价格高，建系组也建议备份即用既有。常见问题验证建议关注试剂对细胞膜修复效果评价。

今年重点是完成国内组建系相关问题统计。也建议课题组在国内正规库保种，公司如碰到售后难度较大的问题，我们可协助完成售后。网站上暂不供应，有种子可讨论细胞救助相关合作。

难养系也是我司统计重点，几年相关技术储备，想在细胞工厂细胞培养量上做些相关统计，已上自动化培养或在开发中组，我们备份种子库与冗余试剂都可提供试用装。试用装需知道您养的细胞名称，扩增培养中痛点。蛋白抗体生产应用可合作上游工艺开发。

相关讨论如需深入。整套体系建议包括耗材部份，会更全面，这里不做详细说明，建系培养相关目的，建议描述详细，及预实验细工参考整套方案推荐。