A-485（AbMole，M9561，CAS No.1889279-16-6）是一种高选择性p300/CBP组蛋白乙酰转移酶（HAT）小分子抑制剂。p300 与 CBP（KAT3B/3A）是细胞内最重要的组蛋白乙酰转移酶，它们通过乙酰化 H3K18、H3K27 及 p53、雄激素受体、HIF-1α 等蛋白，主导增强子组装、超级增强子维持与谱系基因的表达程序。A-485能以低纳摩尔级活性占据 p300/CBP 催化结构域中的辅酶 A 结合口袋，为解析催化型乙酰转移酶的功能提供了化学干预工具。本文梳理了A-485的分子作用机制，及其在细胞与动物模型中的研究应用和实验方案。

一、A-485的分子作用机制

生化实验显示，A‑485（AbMole，M9561）对 p300/CBP 的抑制活性达到低纳摩尔级别（IC₅₀约 10 nM），对 GCN5、PCAF、MOZ/MYST 家族其余乙酰转移酶，选择性超过 1000 倍，属于目前选择性最优的 p300/CBP 催化位点抑制剂之一。A‑485的作用位点位于p300/CBP 催化结构域的辅酶 A 结合口袋，并能阻断乙酰基从乙酰辅酶 A 向组蛋白及非组蛋白底物的转移，最终抑制了相关蛋白的乙酰化修饰。研究表明，在孵育A‑485后，细胞内的 H3K18Ac 与 H3K27Ac 整体水平便呈现出显著下降的现象，增强子区域H3K27Ac修饰信号减弱，BRD4在染色质上的结合同步下降，超级增强子驱动的谱系特异性转录程序被破坏。值得注意的是，部分肿瘤会出现 p300 或 CBP 其中一个基因发生突变 / 失活，此时肿瘤细胞生存增殖高度依赖另一个功能正常的蛋白；A‑485 可以同时抑制 p300 与 CBP，因此对这类谱系特异性肿瘤具有较强的杀伤能力，为解析肿瘤的表观遗传成瘾机制提供了干预手段。

术语小注：谱系特异性肿瘤（lineage‑specific tumours），指肿瘤细胞的存活高度依赖自身细胞起源（细胞谱系）所对应的转录调控网络。

二、A-485在细胞层面研究中的应用

在细胞层面，A-485（AbMole，M9561）在谱系特异性肿瘤细胞模型的研究中有着重要的应用。A-485 在雄激素受体阳性的前列腺癌 VCaP、LNCaP 细胞中，以1~3 μM的浓度处理细胞24~48 h 即能使H3K18Ac水平下降80%以上，雄激素受体靶基因（KLK3/PSA、TMPRSS2）转录下调 5~10 倍，72 h后细胞增殖抑制的 IC₅₀处于 1~3 μM 区间，并伴随凋亡率显著升高。在多发性骨髓瘤细胞系（如 MM.1S、KMS-11）与部分急性髓系白血病细胞系中，A-485 同样表现出 0.5~2 μM 的抗增殖活性（IC₅₀），且敏感性与细胞对残余 p300/CBP 活性的依赖程度呈现正相关的关系。细胞实验中，A-485相关的机制验证常采用以下几种实验方法：Western blot 检测 H3K18Ac/H3K27Ac、RNA-seq 或 qPCR 分析超级增强子关联基因表达、ChIP-qPCR 验证增强子 H3K27ac 丢失；在联合策略方面，A-485 与 BET 家族抑制剂（+）-JQ‑1 或雄激素受体通路抑制剂Enzalutamide（恩杂鲁胺，MDV3100）联用时可产生协同杀伤效应。

三、A-485在动物实验研究中的应用

在动物层面，A-485（AbMole，M9561）的体内应用主要聚焦于小鼠移植瘤模型。在去势雄性免疫缺陷小鼠中接种 VCaP 前列腺癌异种移植瘤后，按 50~100 mg/kg 每日口服给药A-485，肿瘤生长受到了显著抑制，瘤组织 H3K18Ac 水平明显下降且与暴露量相关，而动物体重与血象稳定，耐受性良好。该模型确立了化学分子诱导的p300/CBP 抑制在动物中的可行性，并提示抑瘤效果与肿瘤对 p300/CBP 的谱系依赖程度直接相关。此外，A-485还被广泛用于多发性骨髓瘤、小细胞肺癌及其他谱系特异性肿瘤的移植瘤模型探索，成为肿瘤表观遗传成瘾机制体内研究的常用工具。

四、A-485相关细胞实验（文献参考举例）

该方案适配 p300/CBP 催化抑制后的组蛋白乙酰化、增殖与转录程序检测。

细胞系：人前列腺癌 LNCaP 或 VCaP 细胞（雄激素受体阳性、谱系依赖模型）

检测指标与方法：Western blot 检测 H3K18Ac、H3K27Ac 及 H3 总量；CCK-8 或 CellTiter-Glo 检测细胞活力；qPCR 检测 KLK3/PSA、TMPRSS2 等雄激素受体靶基因；Annexin V-FITC/PI 流式定量凋亡；可选 ChIP-qPCR 检测增强子 H3K27ac。

给药浓度：0.1、0.3、1、3、10 μM

处理时长：信号检测 24 h；增殖检测 72 h

参考文献：Lasko L M, et al. Discovery of a selective catalytic p300/CBP inhibitor that targets lineage-specific tumours. Nature, 2017, 550(7674): 128-132.

*注：上述方法来自公开文献，仅供相同目的实验参考。如实验目的、材料、方法不同，请参考其他文献调整。*

五、A-485相关动物实验（文献参考举例）

该方案适用于谱系依赖肿瘤的体内生长调控与表观遗传药效验证研究。

动物模型：雄性 NOD/SCID 或 BALB/c 裸鼠 VCaP 皮下异种移植瘤模型（维持雄激素依赖性）

给药配制：口服给药，以适宜溶媒配制均一悬液或溶液

给药剂量：50、100 mg/kg，每日 1 次口服

给药方案：肿瘤体积约 150~200 mm³ 时启动给药，每周 2 次测量肿瘤体积与动物体重；终点取瘤组织，Western blot 检测 H3K18Ac 抑制程度，qPCR 检测雄激素受体靶基因表达，并行血常规评估耐受性。

参考文献：Lasko L M, et al. Discovery of a selective catalytic p300/CBP inhibitor that targets lineage-specific tumours. Nature, 2017, 550(7674): 128-132.

*注：上述方法来自公开文献，仅供相同目的实验参考。如实验目的、材料、方法不同，请参考其他文献调整。

六、A-485实验操作关键注意事项

1. A-485 工作液现配现用，DMSO 储存液按用量分装、-80℃ 保存，避免反复冻融；

2. H3K18Ac 为快速动态指标，采样时间窗建议覆盖给药后 2~24 h；

总结

综上，A-485（AbMole，M9561）以低纳摩尔级活性、近1000倍的乙酰转移酶选择性，实现了对 p300/CBP 催化功能的有效干预，为表观遗传调控、超级增强子与谱系成瘾机制研究提供了工具。从增强子乙酰化动态的捕捉，到谱系依赖肿瘤的选择性杀伤验证，A-485在体内外实验中均有着重要的应用。

*本文所述均为科研试剂，仅供科学研究参考

参考文献

[1] Lasko L M, et al. Discovery of a selective catalytic p300/CBP inhibitor that targets lineage-specific tumours. Nature, 2017, 550(7674): 128-132.

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