流式那些 FITC、PE、PerCP-Cy5.5、FMO、单阳管……乱乱的？。本期：带你从原理走到上机的流式细胞术入门——回头看，流式细胞术本身并不难。

Section.01

先说清楚：流式到底是什么

一句话：流式细胞术，就是测量"流动中的细胞"与激光相互作用产生的一系列光信号的技术。

细胞被液体裹挟着排成一列，一个个高速通过激光检测点——每秒可以过上万个。每通过一个细胞，仪器就记录一次它的"长相" (散射光) 和"穿的衣服" (荧光) 。于是你得到的是：单细胞水平、多参数同时测量、可以定量的一份数据。分选型流式还能顺手把你要的细胞群挑出来纯化。

顺便澄清一个常见困惑：

很多人以为"流式"只有一种。其实广义的流式是个家族——我们日常说的"流式"多指分选型流式细胞仪 (可用于分析) 和分析型流式细胞仪；此外还有量化成像分析流式细胞仪、质谱流式等，本期就不赘述。

言归正传，传统流式能测什么？只要能制成悬浮液的样本都行：外周血、骨髓、穿刺液、实体组织 (需要处理) 、培养细胞、微生物、藻类、外泌体……颗粒直径在 100 nm – 100 μm 之间都在射程内。

图 1. 流式能"看见"的对象：从抗体、外泌体、病毒，到细胞、染色体，直至变形虫。

硬限制：它只认悬浮样本，贴壁成团的组织，得先打散。

Section.02

仪器怎么工作:

三个系统，各干一件事

流式细胞仪看着吓人，拆开就是三件事：把细胞排队、给细胞打光、把光记下来，对应液路、光路、电路三个系统。

液路：让细胞排成一队

样本悬液本来是"一团浑浊"，怎么让细胞一个一个通过检测点？靠层流和流体力学聚焦。

嗯......小白想要吃透，除了知其然还要知其所以然，咱们今天还是简单讲讲：

液体和气体可按层流或湍流流动：层流 (Laminar flow) 流体平行分层流动，各层不混合，流动路径稳定可预测；湍流 (Turbulence) 流体运动混乱无规律，与层流相反。流式细胞仪液流系统设计必须严格保持层流状态。

图 2. 层流、湍流及管道中的流速。

当液体在流式细胞仪的管道里以层流状态向前流动时，最终会形成抛物线分布：

• 中心最快：管道最中心的液体流速最快，大约是平均速度的 2 倍。

• 边缘最慢：贴近管壁的液体由于摩擦力，流速几乎接近 0。

——这会产生一个反向的压力梯度，即管道中心压力最低，管壁处压力最高 (伯努利原理) 。这种“外高内低”的压力差，会产生一个向内的推力，迫使液体中的细胞或微粒，全部乖乖地自动聚集到流速最快、压强最低的“正中心”。

 PS：还记得火车站台上的安全黄线不？就是伯努利原理！流速越快的地方，压强越小。高速列车经过时车身附近空气流速快、压强低，离太近会被外侧高气压推向车轨造成危险。

当然，这还不够。实际操作中，流式细胞仪通过流体力学聚焦 (Hydrodynamic Focusing) 技术，将层流和压力差转化为细胞排成单行的机制，实现过程类似“高管套小管”注射器模型。

图 3. 流体动力学聚焦：细胞被收拢进中心液流，排成单列。

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（www.medchemexpress.cn/antibody/cytokeratin-15-antibody-ya1493.html）

HY-P81748，Cytokeratin 15 Antibody (YA1493) 是一个兔来源、无偶联标记、抗 Cytokeratin 15 的 IgG 单克隆抗体。

CD45 Antibody (YA533)

（www.medchemexpress.cn/antibody/cd45-rabbit-mab.html）

HY-P80063，CD45 Antibody (YA533) 是一个兔来源、无偶联标记、抗 CD45 的 IgG 单克隆抗体。

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（www.medchemexpress.cn/antibody/rat-anti-mouse-cd86-antibody-fitc.html）

HY-P83710M，Rat Anti-Mouse CD86 Antibody (FITC)(YA3447) 是一种大鼠来源、偶联异硫氰酸荧光素 (FITC) 标记、抗 CD86 的 IgG2a 单克隆抗体。

参考文献：

[1] Introduction to Flow Cytometry. Alexis Perez Gonzalez, PhD and Vanta Jameson, PhD. Melbourne Cytometry Platform.

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