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MCE 国际站：Temsirolimus

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-50910

CAS：162635-04-3

中文名称：替西罗莫司

Synonyms：替西罗莫司; CCI-779

纯度：99.56%

存储条件：4°C，避光，氮气保存 *溶剂中：-80°C，1 年；-20°C，6 个月（避光，氮气保存）

运输条件：美国大陆的室温；其他地方可能有所不同。

产品活性：Temsirolimus 是 mTOR 抑制剂，IC50 值为 1.76 μM。Temsirolimus 能激活自噬 (autophagy),在动物模型中防止心脏功能恶化。

生物活性：Temsirolimus 是 mTOR 的抑制剂，IC₅₀ 为 1.76 μM。 Temsirolimus 在动物模型中激活自噬 并防止心脏功能恶化^[8]。

体外：Temsirolimus 有效抑制 mTOR 激酶活性，IC50 为 1.76 μM，类似于 Rapamycin 在没有 FKBP12 的情况下 IC50 为 1.74 μM。Temsirolimus (10 nM 至 mTOR 信号。微摩尔而不是纳摩尔浓度 (20 μM) 的 Temsirolimus 处理导致整体蛋白质合成和多核糖体分解的显著下降，同时翻译延伸因子 eEF2 和翻译起始因子 eIF2A 的磷酸化迅速增加[1]。Temsirolimus 抑制核糖体蛋白 S6 的磷酸化，在 PTEN 阳性 DU145 细胞中比在 PTEN 阴性 PC-3 细胞中更有效，并以浓度依赖性方式抑制两种细胞的细胞生长和克隆形成存活[2]。Temsirolimus (100 ng/mL) 有效抑制原代人淋巴细胞白血病 (ALL) 细胞的增殖并诱导细胞凋亡[3]。 MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

体内：CCI-779 (20 mg/kg，腹腔注射) 抑制两种前列腺癌异种移植物的生长，PC-3 肿瘤的生长以剂量依赖性方式受到抑制，并且生长抑制作用大于 DU145 肿瘤[2]。在具有人 ALL 的 NOD/SCID 异种移植模型中，10 mg/kg/天的 Temsirolimus 处理导致外周血母细胞减少和脾肿大[3]。与对照组相比，Temsirolimus (20 mg/kg，ip 5 天/周) 给药后 1 周后 DAOY 异种移植物的生长显著延迟 160%，2 周后延迟 240%。单次大剂量 Temsirolimus (100 mg/kg，ip) 处理可在 1 周内诱导 37% 的肿瘤体积消退。Temsirolimus 处理 2 周还将耐雷帕霉素 U251 异种移植物的生长延迟了 148%[4]。在亨廷顿病小鼠模型中，Temsirolimus 对 mTOR 的抑制可提高四种不同行为任务的表现并减少聚集体形成[5]。给药 Temsirolimus 可诱导显著的剂量依赖性抗肿瘤反应，对抗 8226、OPM-2 和 U266 异种移植物的皮下生长，8226 和 OPM-2 的 ED50 分别为 20 mg/kg 和 2 mg/kg，它们分别与抑制增殖和血管生成、诱导细胞凋亡和缩小肿瘤细胞大小有关[6]。 MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

动物实验：为了生成异种移植，将细胞植入基质胶中；基质胶储存在 −20°C 下，然后在使用前在 4°C 的冰上解冻 3 小时。将细胞轻轻悬浮在 1 mL PBS 中，并在冰上孵育 5 分钟。使用预冷的移液器将细胞转移到含有 1 mL 基质胶的管中，并将细胞浓度调整为 3×107/mL。使用 25 号针头将细胞（0.1 mL 中 3×106）皮下注射到小鼠的两侧。当异种移植长到直径约 5 毫米时，将动物随机分成 10 只小鼠组。进行以下实验：携带 PC-3 肿瘤的小鼠每周 3 或 5 天接受 CCI-779（每天每公斤 1、5、10 和 20 毫克）或载体溶液治疗，持续 3 周。 DU145 肿瘤小鼠仅接受 CCI-779（20 mg/kg/天）或载体溶液治疗 3 周。PC-3 肿瘤小鼠接受以下治疗：(a) 对照，CCI-779 载体溶液；(b) 单独化疗，每周腹腔注射米托蒽醌 1.5 mg/kg 或多西他赛 10 mg/kg，共 3 次；(c) 单独 CCI-779，每天腹腔注射 5 或 10 mg/kg，每周 3 次，共 3 周；(4) 化疗后接受 CCI-779。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

细胞实验：集落形成试验还用于确定前列腺癌细胞在接受各种治疗后的存活率。将呈指数增长的细胞暴露于不同剂量的米托蒽醌或多西他赛 24 小时，或暴露于 CCI-779 3 天。处理后，对细胞进行清洗和胰蛋白酶消化。将连续稀释的细胞接种到 6 孔板中的 5 mL 培养基中。将培养板在 37°C 下、湿度为 90% 且含有 5% CO2 的空气中孵育 10 天。然后用亚甲蓝对培养板进行染色，并计数含有 >50 个细胞的集落。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

激酶实验：将 Flag 标记的野生型人类 mTOR (Flag-mTOR) DNA 构建体瞬时转染到 HEK293 细胞中。48 小时后进行 Flag-mTOR 的蛋白质提取和纯化。在 96 孔板中，在不同浓度的不含 FKBP12 的 Temsirolimus 存在下对纯化的 Flag-mTOR 进行体外激酶测定，并使用 His6-S6K1 作为底物通过解离增强镧系荧光免疫测定 (DELFIA) 进行检测。首先将酶稀释在激酶测定缓冲液中（10 mM Hepes（pH 7.4）、50 mM NaCl、50 mM β-甘油磷酸、10 mM MnCl2、0.5 mM DTT、0.25 μM 微囊藻毒素 LR 和 100 μg/mL BSA）。将 12 μL 稀释酶与 0.5 μL Temsirolimus 短暂混合到每个孔中。通过添加 12.5 μL 含有 ATP 和 His6-S6K 的激酶分析缓冲液来启动激酶反应，最终反应体积为 25 μL，其中含有 800 ng/mL FLAG-mTOR、100 μM ATP 和 1.25 μM His6-S6K。将反应板在室温下轻轻摇动孵育 2 小时（1-6 小时呈线性），然后通过添加 25 μL 终止缓冲液（20 mM Hepes（pH 7.4）、20 mM EDTA 和 20 mM EGTA）来终止反应。在室温下使用标记有铕-N1-ITC (Eu) 的单克隆抗 P(T389)-p70S6K 抗体（每个抗体 10.4 Eu）对磷酸化 (Thr-389) His6-S6K 进行 DELFIA 检测。将 45 μL 终止激酶反应混合物转移到含有 55 μL PBS 的 MaxiSorp 板中。让 His6-S6K 附着 2 小时，然后抽吸孔并用 PBS 清洗一次。加入 100 μL 含有 40 ng/mL Eu-P(T389)-S6K 抗体的 DELFIA 缓冲液。在轻轻搅拌下继续抗体结合 1 小时。然后抽吸孔并用含有 0.05% Tween 20 (PBST) 的 PBS 清洗四次。每孔加入 100 μL DELFIA 增强溶液，然后使用 PerkinElmer Victor 型号的读板机读取板内数据。MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。

IC50 & Target：mTOR 1.76 μM (IC50)

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参考文献：

[1]. Shor B, et al. A new pharmacologic action of CCI-779 involves FKBP12-independent inhibition of mTOR kinase activity and profound repression of global protein synthesis. Cancer Res, 2008, 68(8), 2934-2943.

[2]. Wu L, et al. Effects of the mammalian target of rapamycin inhibitor CCI-779 used alone or with chemotherapy on human prostate cancer cells and xenografts. Cancer Res, 2005, 65(7), 2825-2831.

[3]. Teachey DT, et al. The mTOR inhibitor CCI-779 induces apoptosis and inhibits growth in preclinical models of primary adult human ALL. Blood, 2006, 107(3), 1149-1155.

[4]. Geoerger B, et al. Antitumor activity of the rapamycin analog CCI-779 in human primitive neuroectodermal tumor/medulloblastoma models as single agent and in combination chemotherapy. Cancer Res, 2001, 61(4), 1527-1532.

[5]. Ravikumar B, et al. Inhibition of mTOR induces autophagy and reduces toxicity of polyglutamine expansions in fly and mouse models of Huntington disease. Nat Genet. 2004 Jun;36(6):585-95. Epub 2004 May 16.

[6]. Frost P, et al. In vivo antitumor effects of the mTOR inhibitor CCI-779 against human multiple myeloma cells in a xenograft model. Blood. 2004 Dec 15;104(13):4181-7. Epub 2004 Aug 10.

[7]. Dela Cruz FS, et al. A case study of an integrative genomic and experimental therapeutic approach for rare tumors: identification of vulnerabilities in a pediatric poorly differentiated carcinoma. Genome Med. 2016 Oct 31;8(1):116.

[8]. Jason C. Choi, et al. Temsirolimus activates autophagy and ameliorates cardiomyopathy caused by lamin A/C gene mutation. Sci Transl Med. 2012 Jul 25; 4(144): 144ra102.

品牌介绍:

•   MCE (MedChemExpress) 拥有200 多种全球独家化合物库，我们致力于为全球科研客户提供前沿最全的高品质小分子活性化合物；

•   50,000 多种高选择性抑制剂、激动剂涉及各热门信号通路及疾病领域；

•   产品种类涵盖各种重组蛋白，多肽，常用试剂盒 ，更有 PROTAC、ADC 等特色产品，广泛应用于新药研发、生命科学等科研项目；

•   提供虚拟筛选，离子通道筛选，代谢组学分析检测分析，药物筛选等专业技术服务；

•   设有专业的实验中心和严格的质控、验证体系；

•   提供 LC/MS、NMR、HPLC、手性分析、元素分析等各项质检报告，确保产品的高纯度、高品质；

•   产品的生物活性多经各国客户实验验证；

•   Nature, Cell, Science 等多种顶级期刊及制药专利收录了MCE客户的科研成果；

•   专业团队跟踪最新的制药及生命科学研究进展，为您提供全球最新的活性化合物；

•   与世界各大制药公司及知名科研机构建立了长期的合作。