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SnapGene viewer 是SnapGene 的免费版本,虽然它删减了一些功能,但对于初学者来说依然很实用哦。SnapGene Viewer包含与完全启用的SnapGene软件相同的丰富可视化,注释和共享功能。
https://www.snapgene.com/
这是软件简单的介绍哦!Map:显示图谱;Sequence:显示序列信息;File:打开、建立、保存相关文件等;Edit:编辑功能,包括复制选中一些序列等;View:切换几个视图等;Enzymes:显示、选择酶切位点等;Feature:显示、注释(命名)一些片段等;Primers:添加引物等;
1 质粒可视化与酶切位点的选择
2 引物设计
2.1 酶切位点的方向的选择
从这里我可以看出这个质粒基因表达的方向,EcoR I与Xho I的方向一定要看清哦,小伙伴们,看下面的氨基酸表达的箭头,EcoR I酶切位点虽然在后面,但是它要加在上游引物的前面哦,不要弄反了,这样你的基因会表达不出来的。
2.2引物长度
在目的基因的上下游截取15-21bp序列,点击Primers里的Add primers,根据小编的经验选取Tm值在50-60℃左右,在上述范围内选取合适的bp.
给该引物命名,然后点击Insertion,在该引物上添加之前选择好的酶切位点序列,如图选择了EcoR I,点击Insert即可完成(必要时需要加保护碱基),GC含量为40-60%,然后opaR-F引物为保护碱基CCG,EcoR I酶切位点GAATTC与目的基因18bp; opaR-R 下游序列的选取时点击Reverse Complement,这样就可以反向互补了,引物方向必须是5'-3'。
这项分子克隆实验的小技巧学会了吗?
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GMT+8, 2024-11-26 14:29
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