支原体qPCR检测，绝大多数人会设置阳性质控、PCR无模板阴性，但是“前处理阴性（抽提阴性）”经常被省略，这也是很多假阳性的根源。

PCR阴性只能监控PCR体系、试剂是否污染；前处理阴性是把无支原体的缓冲液，和待测样本经历完全一样：离心、裂解、核酸抽提全过程。用来监控样本前处理环节、提取试剂、移液操作、生物安全柜环境是否存在支原体DNA污染。

如果缺少这个对照，出现阳性结果，你无法区分：是样品真污染，还是抽提过程带入的DNA气溶胶污染，报告结果存在重大风险。

翼和BPMPro100试剂盒说明书强制要求设置前处理阴性对照，完整写入判读标准：前处理阴性FAM通道Ct≥37.5，才代表抽提流程合格；如果前处理阴性出现阳性，整板实验作废，排查抽提环境与耗材污染。

很多进口试剂盒没有强调该对照，造成QC实验室结果溯源困难。翼和配套SOP中给出完整96孔板排布模板，直接复制使用。

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