一、意外发现

2019年发表在《Mutat Res Genet Toxicol Environ Mutagen》上的一项研究，本意是评估一株多巴胺能神经细胞（BE-M17，帕金森病研究中的常用体外模型）的DNA损伤响应。研究者在彗星实验的凝胶背景上发现了大量异常的小颗粒——PI染色阳性，而细胞本身“功能正常”。进一步检测确认：这株细胞已被支原体污染。这个细节值得做细胞实验的人记住：污染的痕迹有时就出现在你最熟悉的读板上，只是你不认得它。

二、DNA损伤本身就在增多

同一项研究给出了定量比较：与同一株未感染的细胞相比，感染细胞的基础DNA损伤（单链断裂与碱基不稳定位点）约为未感染细胞的1.5倍，氧化性嘌呤损伤（8-oxoGua等）约为未感染细胞的8.4倍。再施加50 μM过氧化氢制造氧化应激后，感染细胞损伤的增幅约为未感染细胞的1.3倍。作者特别指出，该模型中不存在感染诱导的炎症反应，说明这些氧化损伤并非炎症的附带产物，更可能来自支原体直接造成的ROS升高或细胞抗氧化能力下降。

三、修复能力被拖慢

损伤与修复是一笔净账。该研究显示：单链断裂与碱基不稳定位点在两组细胞中都能在2小时内回到基线；但氧化性嘌呤损伤的修复出现明显分化——未感染细胞24小时内完成修复，感染细胞30小时后仍未完全修复。换句话说，负责清理氧化损伤的碱基切除修复（BER）通路在感染细胞中效率下降。损伤端增加、修复端变慢，累积是必然结果。

四、p53被压制

2008年，俄罗斯Gamaleya流行病与微生物研究所与美国Roswell Park癌症研究所的研究者在《Oncogene》上给出了机制层面的证据：细胞接触含支原体的条件培养基后，出现NF-κB持续激活、p53活化降低，p53下游的p21 waf1表达与诱导能力减弱，对基因毒性应激诱导的凋亡也被抑制；在测试的多个支原体物种中，M. arginini的作用最强。更值得注意的是：被M. arginini感染的鼠胚胎成纤维细胞变得容易被致癌性H-Ras转化，而同样处理的未感染细胞会进入不可逆的、依赖p53的生长停滞。作者指出，这种使细胞对Ras转化敏感的效果，与用shRNA敲低p53相当。

五、损伤会往下传

2024年，美国马里兰大学人类病毒研究所的团队在《PNAS》上把这条链条推进到了体内：支原体（M. fermentans）的DnaK蛋白能与PARP1、p53相互作用并削弱其活性；表达DnaK的敲入小鼠在接受DNA损伤性致癌物尿烷处理、观察46周后，出现的肿块数量显著高于DnaK阴性同窝小鼠与C57BL/6对照（62只 vs 36只 vs 52只，肿块以淋巴瘤为主）；取自DnaK阳性小鼠的细胞在体外培养20小时后彗星尾显著增加，说明自发DNA损伤水平升高。研究还观察到着丝粒不稳定的迹象（拷贝数变异与结构变异）。作者同时提到，释放到胞外的DnaK可以被未感染的旁邻细胞摄取。

结论与选型

支原体污染真正麻烦的地方，是它同时作用于三条线：损伤增多、修复变慢、凋亡刹车失灵。这些改变不会表现在形态上，也不会写在STR报告或种属鉴定报告里——STR回答的是“这株人源细胞的身份对不对”，种属qPCR回答的是“有没有混进其他物种”，至于培养体系里有没有支原体、有没有正在累积的基因组损伤，只能由支原体检测来回答。三者互为补充，不能相互替代。

因此，用于常规筛查的方案至少应满足三条：覆盖足够广，能覆盖细胞培养中的常见污染种（如M. arginini、M. fermentans）；灵敏度足够高，能在细胞还“看起来正常”时就发出警报；阴性结果可信，需要内置内控来排除PCR抑制造成的假阴性。更重要的是把它制度化：新引入的细胞系入库必检，之后纳入固定的筛查周期。

翼和生物支原体qPCR检测试剂盒，采用TaqMan探针法多重荧光定量PCR，覆盖约120种支原体，灵敏度可达10 CFU/mL，内置内参以规避假阴性，适配主流qPCR仪。

参考文献：

1. Ji Y, Karbaschi M, Cooke MS. Mycoplasma infection of cultured cells induces oxidative stress and attenuates cellular base excision repair activity. Mutat Res Genet Toxicol Environ Mutagen. 2019 Sep;845:403054. doi: 10.1016/j.mrgentox.2019.05.010.

2. Logunov DY, Scheblyakov DV, Zubkova OV, Shmarov MM, Rakovskaya IV, Gurova KV, Tararova ND, Burdelya LG, Naroditsky BS, Ginzburg AL, Gudkov AV. Mycoplasma infection suppresses p53, activates NF-kappaB and cooperates with oncogenic Ras in rodent fibroblast transformation. Oncogene. 2008 Jul 31;27(33):4521-31. doi: 10.1038/onc.2008.103.

3. Benedetti F, Silvestri G, Denaro F, Finesso G, Contreras-Galindo R, Munawwar A, Williams S, Davis H, Bryant J, Wang Y, Radaelli E, Rathinam CV, Gallo RC, Zella D. Mycoplasma DnaK expression increases cancer development in vivo upon DNA damage. Proc Natl Acad Sci U S A. 2024 Mar 5;121(10):e2320859121. doi: 10.1073/pnas.2320859121.

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