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荧光补偿基础知识

已有 23624 次阅读 2010-1-2 14:03 |个人分类:流式知识|系统分类:科研笔记| 荧光补偿, 荧光补偿, 荧光补偿, 荧光补偿

 
 
1。什么是荧光补偿?


每一种荧光分子都发射某一特定波长范围内的光,然而这些荧光的发射光谱会发生重叠,有时这种重叠现象非常显著。比如说FITC、PE 、Cy5-PE,PE-TR
 
为了能够同时检测这三种发射光信号,我们只能通过合适的滤光镜来选择性地采集某一特定波长范围内的光,既图中的灰框。FITC,我们选用530/30滤光镜,既这种滤光镜能够收集515-545nm范围内的光波。然而,我们选用的任何一种滤光镜都不可能仅仅收集一种荧光染料的发射光,比如FITC有一部分发射光进入到我们用来收集PE的区域,因此, 在FL2通道上采集的光不仅仅有来自PE的,还接受到一部分FITC的发射光信号;具体来说,我们必须将FL2荧光通道收集的光信号中属于FITC的那一部分减去,才能确切地知道PE的发射光到底是多少。那么这种调节的过程就是我们所谓的荧光补偿。

2。 荧光补偿的方法

大体来说,有2种补偿方式,仪器补偿或者软件补偿,这2者之间的差别可见下表



3。如何确定是正确的补偿呢?

可以参看这个连接


http://www.drmr.com/compensation/

http://blog.sciencenet.cn/blog-349948-283592.html


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2 严云 王汉森

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