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一种快速制备治疗H7N9单克隆抗体的技术方案 精选

已有 10057 次阅读 2013-4-15 22:51 |系统分类:科研笔记| 抗体, H7N9

H7N9流感疫苗至少要7个月才能出来。单克隆抗体是一个非常有效的治疗方法,从康复病人的身上分离出来的抗体注入到病危患者体内,有非常明显的疗效,这个办法在SRAR期间使用了多次。但毕竟康复病人数目有限。我们有一个高通量测序的方法可以快速大量制备H7N9单克隆抗体的技术,最多可以节省2个月的时间,以前我们用这个技术筛查过流感疫苗的抗体,希望这次能将这个新技术用到H7N9



H7N9感染后快要康复的病人,他们外周血的血清中有大量的抗H7N9的抗体,这些抗体是他们的B细胞分泌的,我们可以把B细胞提出来,把B细胞所有的RNA分出来后混合,通过RT-PCR把抗体的RNA扩增之后,用二代测序来测序。这样我们就会得到数十万个抗体的基因序列。一般来说,通过分析基因序列,丰度最大的抗体克隆就是H7N9特异性的了。知道了流感特异性的基因序列之后,体外进行合成。这种方法无需经过前期复杂的筛选过程,可以在一个月内获得抗体序列。


优势:

1,  特异性高,亲和力高。根据AffinityMaturation理论,亲和力高的B细胞会大量增殖,因此反推过去,基因序列丰度最大的抗体是亲和力高的。

2,  时间短。常规单克隆抗体制备时间长,抗体筛查费时间,往往要4个月。而我用高通量测序的方法可以省略筛选这一步,预计最多可以节省2个月。

3,  这个抗体是人源的,副作用小。

4,  样本需要少,只要3毫升外周血就可以。


前期的技术基础


我们今年在美国《科学》杂志的子刊Translational Medicine发表了一篇文章,我们给志愿者接种流感疫苗,七天后,我们从外周血提取的B细胞中,通过高通量测序就筛查出了高亲和力的抗体的基因序列。这种方法无需经过前期复杂的筛选过程,可以在一个月内获得抗体序列。取得序列后,可通过构建一个自动化的而合成平台或者通过商业的基因合成进行体外抗体合成。在应急方面,我们的抗体制备方法无疑有着很大的优势,能在最短的时间内取得最有效的抗体序列,并且由于抗体序列来源于人,也不会产生种间免疫反应,非常安全。合成以后的抗体用抗原检测其效果即可投入使用。


目前最大的困难是拿不到样本。




H7N9禽流感来袭
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