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分光光度的“零点”取舍

已有 3888 次阅读 2014-6-6 19:49 |个人分类:未分类|系统分类:科研笔记| 光度计, 零点

     在采用分光光度计标准曲线法测定样品某物质的的浓度时,常常在原点的取舍问题上疑惑不解,问过n个老师,答案和解释多种多样。偶一日突有所悟,所得如下。若有异议,敬请畅所欲言。
 
     原点,(0,0)点是一个“隐藏”的试验点。这一点在实验中和数据处理中十分重要。若线性偏离这点,说明试验中“空白”,“调零”有问题。如果,试验中“空白”,“调零”没有问题,这一点对线性关系的偏差应该为最小。
 
    个人总结:在进行线性回归计算时
     1、若加入零点后R的平方急剧减少,而不加入零点时R的平方很高,说明实验数据的线性很好,处理数据时,不能把原点参与线性相关,得出的方程其有效作用域为实验数据的最小值到最大值之间,也就是利用该方程反推浓度时,样本的OD值要落在作标准曲线时的OD值的区间;(即为标准加入法)
      2、如果把零点加入线性相关计算时对R的平方影响不大,甚至使其更大,说明从零点到实验的最大值之间都有很好的线性相关性。处理数据时要把原点加入标曲的计算。得出的方程的有效作用域为零到实验数据的最大值之间。也就是利用该方程反推浓度时,样本的OD值要落在从零到作标准曲线时的最大OD值的区间;(即为标准曲线法)
 
由上可见,后者得出的回归曲线的应用范围更大,但是实验数据更为难得。另一方面也说明原点是否参与回归要具体情况具体分析,同时样本的OD值不一定非得落在标曲的数据范围内。也提醒我们在得到标曲的数据时要尽快分析其有效作用域,以利于后续样本数据的取舍。
 
还需要进一步探讨的是怎么量化零点的取舍问题。当然取舍不定时还是保守为上。
 

 



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