Part 1：产品选择

：我要买 Human EGF 用于体外细胞培养，网上一查，好多种相似产品，我该如何选择？

：重组蛋白选择，有几个重点选择标准，我给你们列出来了！

图 1. 重组蛋白表达步骤

图 2. 重组蛋白表达体系的选择和对比

选择因素 2：产品特性

活性数据 (Biological Activity)

ED₅₀ 半数有效量 (Median effective dose, ED₅₀) 在量反应中指能引起 50% 最大反应强度的药量，在质反应中指引起 50% 实验对象出现阳性反应时的药量。一般是通过其在标准化条件下对特定细胞类型的影响 (例如刺激细胞增殖) 来测量的。

: 如下图中，通过Human EGF 剂量依赖性刺激小鼠 BALB/c 3T3细胞增殖，ED₅₀ <0.2 ng/mL。

一个活性单位是每毫升具有最大响应作用 50% 的细胞因子的数量：

Human EGF 1 个 unit (1U) 就是 0.2 ng/mL，每 1 mg 的 Human EGF 的活力值 (unit) 为:

即 Human EGF 的比活力为 5.0 × 10⁶ units/mg。

计算当然也是有捷径的：

进入公众号 “MCE 抑制剂”-重组蛋白复溶计算器-比活力计算器

Part 2：老生常谈—重组蛋白复溶及保存

：由于工艺原因，蛋白冻干粉产品会呈现粉末状或肉眼不易观察到的透明薄膜状、胶冻状、雪花状，这些都是正常现象。冻干的体积大小也会受冻干前缓冲液组分、盐离子浓度、产品浓度等影响。此外，在运输过程中，冻干颗粒可能会分散，并粘附于瓶壁和瓶盖。

MCE 保证每管产品的蛋白总量达到标示含量。说到这里，讲讲怎么更好地溶解重组蛋白吧~

第一步：开盖前需离心

还是以 Human EGF 为案例；10 μg 规格溶解

敲黑板：无论长期实验还是短期实验，溶解的浓度不低于 100 μg/mL！！

2、再加 70-80 μL 含载体蛋白 (0.1% BSA, 5% HAS, 10% FBS, 或 5% 海藻糖) 的缓冲液/培养基

第三步：产品保存

：以下一些小细节也要注意。

上期给大家说到：化合物的溶解可以借助水浴、超声、涡旋、震荡等方法助溶。但对于重组蛋白来说，具备一定的空间结构会使其活性更佳。

正确操作：移液器枪头轻轻吹打混匀或者上下颠倒混匀。若无法做到充分溶解，可以将复溶产品至于水平摇床低速摇一段时间或 4℃ 静置 2 h 以上。

特别注意的是，稀释用的含载体蛋白的溶液是指有一定缓冲能力、pH 值为中性的溶液，如 PBS、培养液 DMEM 或者 RPMI1640 等。不可直接用水来代替。

重组蛋白的融合标签是在目的蛋白 N 端或 C 端进行融合表达的特定蛋白、多肽或寡肽标签。常用的标签有 His、GST、MBP、Trx、TF、MBP、Nus、SUMO、Flag 和 Fc 等。