1) 超强顺磁性，在磁场中能够迅速聚集，离开磁场后又能均匀分散；

2) 合适且均一的粒径，保证其具有足够强的磁响应性又不会沉降；

图 1. MCE 磁珠组成

A、G、L、A/G 代表 Protein A、Protein G、Protein L 及 Protein A/G；

Anti-HA、Anti-Flag、Anti-c-Myc、Anti-GST 代表 Anti-HA 抗体、Anti-Flag 抗体、Anti-c-Myc 抗体及 Anti-GST 抗体

选磁珠时，首先关注磁珠磁性 (磁吸时间)、粒径 (大小及均一度) 等。其次根据实验目的，选择合适的表面活性基团以及由此衍生的偶联方式、蛋白结合量等。

比如，如果您的目标蛋白带有融合标签，可一步到位选择：

· Anti-HA Magnetic Beads (HY-K0201)

· Anti-Flag Magnetic Beads (HY-K0207)

· Anti-c-Myc Magnetic Beads (HY-K0206)

· Anti-GST Magnetic Beads (HY-K0222)

如果您的目标蛋白带有生物素标记，可选择

· Streptavidin Magnetic Beads (HY-K0208)

如果您有可识别靶蛋白的抗体，可选择

· Protein A/G Magnetic Beads (HY-K0202)

· Protein A Magnetic Beads (HY-K0203)

· Protein G Magnetic Beads (HY-K0204)

· Protein L Magnetic Beads (HY-K0205)

下面以 Protein A/G 磁珠为例，详述 IP 实验步骤、可能存在的问题及解决方法。

制备抗原样品 (细胞裂解物) 是 IP 的第一步，也是关键的一步。正确的细胞裂解液可以稳定天然蛋白质构象、抑制酶活性、最大限度地减少抗体结合位点变性并释放细胞或组织中的蛋白质。一般可选 NP-40、RIPA、Western 及 IP 细胞裂解液等。抗原样品应始终保存在冰上，并将蛋白酶抑制剂 添加到裂解液中以防止蛋白水解。

注 1：Co-IP 实验时，常用 NP-40 等非离子型裂解液，以免破坏蛋白-蛋白相互作用。

注 2：确保目的蛋白在抗原样品中有较高水平表达。

通过此步骤，您将获得磁珠—抗体—抗原样品复合物。磁珠、抗体、抗原样品的加样顺序对靶蛋白得率有一定影响。

All in one——直接将磁珠、抗体、抗原样品混合到一起；

直接结合——抗体和磁珠先结合，再和抗原样品结合；

间接结合——抗体和抗原样品先结合，再和磁珠结合。

可选步骤 2——抗体的交联固定：如果不希望抗体与目标蛋白共洗脱，可在直接结合时，使用交联剂将抗体共价连接到 Protein A/G 上。后续使用酸性洗脱法洗脱靶蛋白。