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细胞转染小秘籍 | MedChemExpress

已有 1307 次阅读 2022-9-6 12:51 |系统分类:科研笔记

小 M 敲黑板!!朋友们,是不是忘了年前我们分享的实验宝典了!不都告诉你们细胞转染的一大法宝了吗!赶紧搬好小板凳跟着我一起复习一下。


细胞转染实验是生物学实验中较为基础的实验,主要指将 DNA/RNA 导入真核细胞。细胞转染方法五花八门,常见的可分为化学法、物理法和病毒法。


先前小 M 已经介绍过各种转染方法的优缺点了 (见 “**心法” 有三式~),在传统的转染方法 (如磷酸钙法、电穿孔法、病毒法等) 转染效率低、细胞毒性大、重复性差的情况下,以 Lipo3000 为主的阳离子脂质体转染试剂脱颖而出,一度成为转染界的“热门选手”。但是它贵啊!稍一不慎,人财两空,哦不,是细胞和试剂都没了,岂是一个惨字了得。


图 1. 常见转染技术原理


想要高效又价美的转染试剂吗?


MCE 重磅推出的性价比之王 PolyFast Transfection Reagent(HY-K1014),宿主范围广转染效率高、细胞毒性小,最最最关键的是价格只有 Lipo3000 五分之一!!!Lipo3000 五分之一!!!Lipo3000 五分之一!!!嘿嘿,重要的事情说三遍。


图 2. 细胞转染步骤


小白: PolyFast Transfection Reagent 也是属于阳离子脂质体转染试剂吗?
小M: 不是哦!PolyFast Transfection Reagent 属于阳离子聚合物转染试剂,在确保高转染效率的同时,对细胞毒性更小!

小白: 那可以使用有血清的培养基吗?

小M: 可以使用有血清的培养基。但对于一些难转染细胞,建议刚开始转染前使用无血清培养基,至少转染一小时后再换成有血清培养基。

小白: 那培养基中含有抗生素会对细胞转染有影响吗?

小M: 可添加抗生素。但是为了提高转染效率,建议刚开始转染前使用无抗生素培养基,后续可根据具体的实验体系添加相应抗生素。

小白: 那在具体的操作过程中,DNA 和 PolyFast Transfection Reagent 的比例是多少呢?

小M: 我们推荐的 DNA (μg) 和 PolyFast Transfection Reagent (μL) 的用量比例为 1:3。如有必要,可在 1:1-1:5 的范围内调整以优化转染效果。最佳转染条件因不同的细胞类型和培养条件而有所区别,转染前,可做预实验摸索最佳转染比例。

小M: 此外,除了转染质粒 DNA,我们的转染试剂也适用于 RNA 转染~

小白: 那可以同时转染两个质粒吗?

小M: 当然也可以啦!共转的话,建议总 DNA 及 PolyFast Transfection Reagent 的用量同步提高两倍,再根据具体的实验结果摸索两个质粒的使用比例。

小M: 就是如此优秀,小 M 带大家一起来看下我们的测试数据吧。


宿主范围广

MCE PolyFast Transfection Reagent 对多种常见细胞具有高水平转染效率,也可转染一些原代细胞和难转染细胞。


下表列举了本产品适用的部分细胞系。


图 3. 适用细胞系


转染效率高

图 4. HEK293 细胞中和 BHK-21 细胞中转染效率比较


细胞毒性小

图 5. 转染效率比较和细胞活力测定

左:293 T 细胞,pcDNA3-C-REP 质粒 (2.5 μg);PolyFast Transfection Reagent (7.5 μL);右:Huh-7 细胞活力测定



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