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细胞建系,规模培养,自动化培养技术储备相关统计

已有 558 次阅读 2024-3-13 08:14 |系统分类:科研笔记

国内细胞建系,无解问题参考。(问题细胞常规解决都是丢弃为主,以下问题解决参考统计目的是任何问题分析清楚原因,给解决问题找到清晰解决思路为目的,还在统计中,不对处老师提携指点)

种子库试剂、耗材、手法、经验等长期评测讨论问题汇总,

进口耗材试剂为主,国产替代为辅助,相关长期问题统计。

目的:国内建系参考目的,含血清为主、血替为备份。含血清要点,问题痛点统一后,易重复,

含血清理由:国内几十年培养大多数都很熟悉培养特性,问题解决技术储备多,国内建系各方面资源充足,以下所有解决问题参考,都围绕着建系目的。

以下几点来自案例细胞解决,结合上述要求,

  常见问题关于黑点

细工建议参考,用对试剂耗材(种子库级别细胞不建议用便宜试剂,保种上百只种子细胞,也用不了多少钱的)胰酶轻柔处理(避免枪直接吹打细胞损伤也是较重要指标参数),几代或十几代后,黑点会全部消失。这个建议也只是救助办法参考建议,经历过黑点的细胞,建议重新保种国内正规库来源细胞。

  问题细胞系生长慢-原代生长慢-细胞养几代后就爬爬这种情况

    细工建议参考 给出方案是进口瓶培养(康宁,nunc,德国产细工全部现货) ,种子库级别试剂(三千以上胎牛,我司验证五年以上南美)我司培养基或者是GIBCO培养基,放足培养基(多些也没关系)几天不动,看下恢复情况,结合我司胰酶(无损消化)传几代应该能找回较好状态,该方法也适合细胞养几代后就爬爬这种情况(上述方法也适合细胞养传代后细胞就爬爬这种情况,该因素原因很多,具体情况集体分析)该方法也建议原代首代培养(类器官)就是普通培养基加胎牛(因子贵,lag phase长、无血清不稳点)全部能替代,细胞够多或稳定后在上无血清可做参考。类器官配套耗材U型低(不加辅助条件成球)及磁珠配套磁力成球可来信告知索取资料及技术讨论。邮件联系

气泡培养伴随细节处:

吸液按到底,很多会忽略。大部分问题可解决,

上述问题细工统计解决问题比较顺利,大部分也没有常规判断的支原体等问题。23年解决几个案例非常成功。

成瘤不稳定组参考,首发少数技术老师参考

瓶,慢养慢传代慢生长,无损胰酶,少二氧化碳,减缓生长,减缓分化,理由:来自成干成球培养,难养细胞株痛点统计规律相似特点。分出一批评测,操作更简单,给成瘤不稳定组,提供一组备份条件,从成干特点上看,优势挺大的,也给出一套备份技术储备。

提醒:这类问题如有,培养部分上述注意外,种子来源非常重要,如是长期课题,种子建议国内正规库重新订购,并把试剂耗材部分尽量于正规库一致,一组,上述瓶并减二氧化碳一组,成干厌氧培养可查减缓细胞分化(理由一组救治培养,千万别图块)

细胞自动化相关技术统计储备,

1:细胞消化(细胞工厂含血清方案)难消化细胞统计,容错率及应用性广方案统计(高通量转染细胞处理部分技术储备)。

2:悬浮贴壁反向训化,避免细胞分化,超量培养应用统计。

3:冻存:免疫悬浮,原代上皮,等对冻存要求高,或负80常年冻存前技术统计与推广。

4:正常上皮建系,单克隆,大规模培养等,可行方法反复验证。

5:高通量培养与转染,培养相关技术储备。



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2 杨卫东 杨正瓴

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