最近，做实验出了一些问题。如果事先考虑全面的话，本来是完全可以避免的。在此作为一个教训，请大家引以为戒。

       我做的是一个植物蛋白的原核表达。首先，分析了该基因的限制性内切酶位点分布情况，发现其中的SalI-250位点可用，读码框不变，这样做该蛋白的区段表达的话，不需要重新PCR扩增、克隆，可以节省一些时间。但是，我忽视了所用的原核表达载体pET-30a和pGEX-6p-1的多克隆位点中，SalI是非in-frame的，导致用SalI酶切后插入该基因时，会造成移码突变（改变ORF），从而不能正确表达该蛋白。因此，现在得从头开始，造成了相当大的损失。

      毛主席曾说过：“绝不打无准备之仗”。看来只有未雨绸缪，考虑周全，才能事半功倍，百战百胜！