流式细胞仪检测凋亡和坏死,我们实验室是用BD Bioscience 公司的FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit。主要步骤如下
(1)细胞接种于25 cm2瓶子,细胞密度100万个/瓶。
(2)接种24小时,药物处理。
(3)消化细胞(建议用带EDTA的胰酶,消化充分),并用冷的0.01MPBS清洗两遍。
(4)稀释10×binding buffer成1×buffer(双蒸水配制),每管细胞加1毫升buffer重悬,细胞浓度为100万个/毫升。
(5)取100微升细胞液入流式管,每管加5微升PI和FITC Annexin V,用移液器轻微混匀,室温避光放置15分钟。
(6)加400微升1×buffer,混匀,1个小时内流式细胞仪检测。
有三管细胞作对照
① 不加染料
② 1uM Staurosporine 处理4小时细胞诱导凋亡,只加FITC Annexin V,
③ 细胞煮沸30秒,诱导坏死,只加PI
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