凋亡和坏死检测方法很多，我们实验室在PI和Hoechest染色细胞计数、流式细胞仪以及Ladder电泳等方面有一些经验。

PI和Hoechest染色凋亡和坏死细胞计数

主要试剂：Propidium iodide（PI）、Hoechst 33258，购自Sigma公司，用无菌双蒸水配成储存液1mg/ml, 4度保存；4%多聚甲醛；多聚赖氨酸。

主要原理：PI能透过坏死细胞膜，将坏死细胞染成红色；Hoechst 33258能透过正常细胞膜，并与染色体结合，能显示正常细胞和凋亡细胞，凋亡细胞染色增强变亮，并出现核染色质浓缩、边移和碎裂

主要步骤

（1）将灭菌盖玻片凃多聚赖氨酸，晾干后置入24孔板。

（2）细胞计数并接种，24孔板，每孔接种7.5万个细胞。

（3）接种24小时后，药物处理。

（4）处理结束后，用无糖平衡盐洗两遍，加入Propidium iodide（PI）和Hoechst 33258（用无糖平衡盐溶液配制成0.01 mg/ml,即稀释100倍），避光温浴10分钟，

（5）用无糖平衡盐缓冲液洗两遍后，加用4%多聚甲醛固定10分钟。

（6）无糖平衡盐缓冲液清洗多聚甲醛，然后夹取盖玻片放在载玻片上，荧光显微镜观察摄像。PI荧光为红色（620nm）, Hoechst 33258荧光为蓝色（480nm）

（7）在盖玻片的四个象限，随机拍摄三个视野（200倍下），总共有12个视野。统计12个视野的细胞总数，凋亡细胞数和坏死细胞数，并算作一个样本。