先来说下几个英文缩写：

   MTT：MTT全称为3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。能被琥珀酸脱氢酶还原。

   TMB： 四甲基联苯胺（3，3’，5，5’-Tetramethylbenzidine）是一种脂溶性较强的基团。HRP作用显色的底物。

   DMSO：二甲基亚砜，无色的含硫的非质子型液态有机溶剂。溶解性好，被称为万能溶剂。MTT中作为溶剂溶解MTT被还原后生成的甲瓒（formazan），后用酶标仪读OD492nm.

   HRP：辣根过氧化物酶，作为二抗上的酶标记物。

小鼠T淋巴细胞增殖实验----MTT法

   步骤：

   血球计数板之前的操作：脱臼处死小鼠，实验组的和naive组的，分别取脾脏。在1~2ml的1640中研磨，后2000rpm 5min离心。去上清，加红细胞裂解液，2分钟后，加血清终止。离心，2000rpm 5min。加血清的1640悬浮，玻璃棉过滤除掉B细胞，留下T细胞。

  计数后，取出数量为10的6次方左右的细胞，加入1ml的血清1640。按照设计的顺序，每孔100ul的加细胞。阳性对照加ConA，阴性加BSA。

  37°C，5% CO2，培养48~72hours。

  加MTT（之前要过滤除菌），反应4小时。

  离心除掉多余的MTT，加入DMSO进行溶解，读数，OD492nm。

  刺激指数SI的计算： SI=（实验组OD-培养本底OD）/（对照组OD-培养本底OD）。

 

   应用到琥珀酸脱氢酶，它在TCA 循环和电子传递链上其电子传递的作用，位于线粒体内膜上。作为活细胞的标志。还原MTT，生成不溶性的formazan。生成的量与活细胞数量呈正比。在反应的过程中，细胞色素C有没有作用，不知道。查了几个版本，大多数没有提到。恩，以后接着查。

  颜色上，培养基是红色的。MTT是黄色的。formazan是蓝紫色。

  Elisa中的TMB显色原理。HRP是一种酶。TMB是一种供氢体的染料。在HRP催化下，提供氢给H2O2，自身被氧化成蓝绿色，之后酸终止反应。反应在短时间内会因H2O2用完，而结束。于是，延长时间也没有用。

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