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Affinity(亲和力): the strength of binding of one epitope to a monovalent antibody, such as Fab fragment, and is expressed in terms of the association constant, Ka.
亲和力为一个抗原表位与单价抗体结合的能力,用Ka表示(M-1,1/moles per liter),值越大表示亲和力越大,可高达1012M-1。室温时,大部分抗原抗体相互作用可于1h内达到平衡,但在4度时却要更长时间(over night)才能达到平衡。
Avidity(亲合力):a measure of the contribution of multivalent interactions to the stability of the antigen-antibody complex.一个抗体分子与整个抗原之间的结合强度。
区别联系:低affinity(亲和力)的抗体也许不适合进行免疫沉淀,但往往可以于免疫组化实验中得到很好的结果,这正是由于其高Avidity(亲合力)。然而与蛋白的低affinity(亲和力)交叉反应也可在免疫组化技术中造成许多麻烦。
Specificity(特异性):由于抗体识别抗体相对较小的区域,故由于抗原分子之间结构有相关性的话,抗体偶尔识别其它抗原的现象也就不奇怪了。免疫组化不容易验证抗体的特异性,一般要用IP或WB来验证。
下面用一表来描述特异性在各种免疫化学反应中的区别:
技术 |
交叉反应 |
注意事项 |
评 价 |
免疫染色 |
普遍 |
较难识别,因为证实抗原一致性的辅助方法有困难 |
两个无关抗体的对照很重要 |
免疫沉淀 |
偶尔 |
区别交叉反应和相关性很重要 |
需设立好的对照 |
免疫印迹 |
普遍 |
容易识别,因为根据抗原分子的大小可鉴定 |
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免疫亲和纯化 |
偶尔 |
应该避免使用交叉反应抗体 |
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