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(1)二甲苯(Ⅰ) 5-10 min
(2) 二甲苯(Ⅱ) 5-10 min
(3) 95%乙醇(Ⅰ) 1-3 min
(4)95%乙醇(Ⅱ) 1-3 min
(5)80%乙醇 1 min
(6)蒸馏水 1 min
(7)苏木精液染色 5-15 min
(8 ) 流水稍洗去苏木精液 1-3 s
(9) 1%盐酸乙醇 1-3 s
(10) 稍水洗 10-30 s
(11)促蓝液返蓝 10-30 s
(12) 流水冲洗 10-15 min
(13)蒸馏水过洗 1-2 s
(14) 0.5%曙红液染色 1-3 min
(15) 蒸馏水稍洗 1-2 s
(16) 80%乙醇稍洗 1-2 s
(17) 95%乙醇(Ⅰ) 2-3 s
(18) 95%乙醇(Ⅱ) 3-5 s
(19) 无水乙醇 5-10 min
(20) 石炭酸二甲苯 5-10 min
(21) 二甲苯(Ⅰ) 2 min
(22) 二甲苯(Ⅱ) 2 min
(23) 二甲苯(Ⅲ) 2 min
(24) 中性树胶封固
注:①第(10)、(11)步可省去,(12)步冲水时间需延长至20-30min。
②第(20)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇。
* 冷冻切片HE染色步骤:
(1)冰冻切片固定 10~30 s
(2)稍水洗 1~2 s
(3)苏木精液染色(60℃) 30~60 s
(4)流水洗去苏木精液 5~10 s
(5)1%盐酸乙醇 1~3 s
(6)稍水洗 1~2 s
(7)促蓝液返蓝 5~10 s
(8)流水冲洗 15~30 s
(9)0.5%曙红液染色 30~60 s
(10)蒸馏水稍洗 1~2 s
(11)80%乙醇 1~2 s
(12)95%乙醇 1~2 s
(13)无水乙醇 1~2 s
(14)石炭酸二甲苯 2~3 s
(15)二甲苯(Ⅰ) 2~3 s
(16)二甲苯(Ⅱ) 2~3 s
(17)中性树胶封固。
注:第(14)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇。
染色结果:细胞核蓝色、胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色。
4.12 切片脱水透明 切片经HE染色后,要彻底脱水透明,才能用中性树胶封盖,。如果脱水不彻底,封片后呈白色雾状,镜下观察模糊不清,且容易褪色。切片1-2级无水乙醇脱水,也可使用石碳酸二甲苯进行脱水。石碳酸有较强脱水能力,但长时间可使切片脱色,因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。
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