今天和Elena讨论了一下免疫染色的一些问题，收获良多。

首先是用多聚甲醛（PA）固定时间长短的问题。PA固定时间长，组织保存得好，但是不利于抗体识别。因为PA的作用就是使蛋白发生交联，交联的越多当然结构越好。如果不染色，单使用DIC或者看自发GFP表达，我想PA固定时间长一点比较好。但是如果发生交联太多，蛋白质抗体表位就有可能被改变或者掩盖，不利于抗体识别。所以PA固定时间的长短，是在染色效果和结构稳定之间做个取舍。

然后就是抗体反应前的封闭剂的作用。以前一直使用的是血清或者BSA蛋白。在这里用的是化学合成封闭剂chemical blocker。chemical blocker和TritonX100以及sodium azide用PB溶解，称谓CTA。 blocker当然是封闭非特异性表位的，TritonX100我今天才知道，它是拿来做去垢剂，溶解质膜，在细胞膜上打洞，使抗体易于进入细胞内的。想想以前如果加上Triton不知道染色效果会不会不一样？！不过当然以前是细胞膜表面的肾上腺素受体，但是加了triton，也许细胞内的受体也会被标记上。