科学研究经历回顾之一：硕士研究生

我的硕士研究生是在中国科学院读的，第一年在北京集中学习理论课，第二年及第三年才到广州的研究所开展实验工作，刚开始是跟着实验室的研究助理及博士们学习，也在导师指导下做了一些各种课题尝试，验证导师的想法，同时寻找硕士研究生论文课题，但是一直没有明确的论文课题做，真正找到论文课题是在一次听了来自迈阿密的一个做细胞自噬的教授的讲座后，受到启发，我试图探索在细胞自噬及细胞热休克反应之间是否有关系，幸运的是，两者存在明显的关联，这个时候已经研究生第三年了，所以时间是有点急迫的，有一段时间为了赶进度，我晚上就裹着睡袋直接睡在休息室，好在实验进展顺利，虽然这个项目还有很多工作可以继续做，但对硕士毕业已经足够，就没有继续研究，后来做了好几个不错的课题也是因为时间或者项目的关系，浅尝辄止，咬一口就没继续了，很是可惜，也为缺乏自主决定权而感到遗憾。

研究所的学术氛围挺好，实验材料比如细胞系之类的材料在研究所内部就可以便捷地相互分享，使硕士研究生论文工作及时完成，保证了顺利毕业，虽然学位证因为文章没有发表而晚了一年拿到，但是我对硕士论文的工作是满意的，是我研究事业的起点，所有结果都百分百保真，准确无误。硕士以后做的研究工作都存在一些开放性及不确定性，比如有的课题我们只是提出了一种可能就发表了，后来觉得另一种可能也许更合理，但已经早早收场不做了。

我的硕士研究工作发现，在哺乳动物细胞中热处理可以诱发细胞自噬，热休克转录因子1（HSF1）是自噬发生的负调控因子。如果用热休克反应预处理细胞，再诱导细胞自噬，则细胞自噬增加的程度会发生明显的变化。那个时候细胞自噬的研究还没有获得诺贝尔奖，检测细胞内自噬水平的重要方法之一就是看自噬体上的标志分子LC3-II的水平及分布，LC3-II与GFP融合的重组蛋白，会使荧光聚集在自噬体上，形成显微镜下一颗颗的亮点。细胞自噬增加的时候LC3-II的蛋白水平也会增加。直接上图吧。

我的这篇文章最初是投在《autophagy》杂志上的，只需要小小的调整就可以发表，但是当时硕导有事不在研究所，联系不上，我又是第一次投文章，毫无经验，最后为了尽快拿到学位证就改投了一个小杂志，遗憾。

图解：HeLa和293T细胞经过热处理后恢复不同时间；其他细胞系细胞热处理后恢复6小时。ATCC来源的MCF7因为缺乏Beclin1/ATG6而不能诱导自噬，提示热诱导的细胞自噬依赖Beclin1/ATG6。

图解：热处理使细胞内LC3基因的mRNA增加。

图解：HeLa细胞和HEK293T细胞在热处理前，在培养基中加入抑制剂，热处理后恢复6小时，收集细胞蛋白做免疫印迹检测，这是为了验证自噬流的完整性。

图解：稳定表达GFP-LC3的HeLa细胞经过热处理后，共聚焦显微镜下出现大量绿色荧光聚集点，提示细胞自噬体的增加。

图解：电镜结果。

图解：热处理引起细胞内HSF1发生高度磷酸化反应，HSF1转录活性激活的特征之一。

图解：HSF1表达水平降低增加细胞内的LC3-II水平。

图解：下调HSF1表达水平增加细胞内的GFP-LC3聚集。

图解：表达组成型活性的HSF1降低细胞内的LC3-II 水平。

图解：组成型活性的HSF1抑制细胞内的GFP-LC3聚集。

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