|
O-Propargyl-Puromycin(OPP,OP-Puro,AbMole,M14749)是嘌呤霉素(Puromycin)的衍生物,其末端带有炔烃基团(Alkyne),这种化学修饰可用于对新生蛋白质进行高效标记与检测,因此OP-Puro是研究蛋白质合成的重要工具。O-Propargyl-Puromyci的作用机理基于嘌呤霉素的经典特性:作为氨基核苷酸抗生素,嘌呤霉素或者O-Propargyl-Puromyci可被核糖体识别并共价插入延伸中的多肽链C端,导致翻译提前终止[1]。但与嘌呤霉素有所不同,O-Propargyl-Puromycin(CAS No.:1416561-90-4)的炔基可通过点击化学(click chemistry)与叠氮化物修饰的荧光团(如Alexa Fluor-azide)或生物素(biotin-azide)特异性结合,实现新生蛋白质的可视化研究或者量化分析[2]。O-Propargyl-Puromycin能在活细胞(如小鼠睾丸生精细胞[3]、大鼠胰岛细胞[3])或复杂模型(如类器官PDOs[2]、非洲爪蟾脊髓神经元[4])中动态监测翻译活动,无需依赖放射性标记或遗传改造[5]。在科研应用中,O-Propargyl-Puromycin标记后的检测策略可分为以下两种:通过显微镜观察OPP-荧光团偶联物,揭示蛋白质合成的亚细胞分布。例如,研究发现非洲爪蟾神经元中,突触诱导蛋白Agrin通过mTOR/4E-BP1通路局部激活翻译,而O-Propargyl-Puromycin信号在突触接触位点显著富集,证实了这一发现[4];第二种检测方法是利用组学技术进行量化分析。在原理上,O-Propargyl-Puromycin(OPP,OP-Puro,AbMole,M14749)可实现全蛋白质组水平的新生肽段定量。例如,研究者通过链霉亲和素珠捕获生物素化OPP-多肽,随后用于分析小鼠胚胎植入前发育过程中蛋白质合成的全局变化[6]。AbMole为全球科研客户提供高纯度、高生物活性的抑制剂、细胞因子、人源单抗、天然产物、荧光染料、多肽、化合物库、抗生素等科研试剂,全球大量文献专利引用。
参考文献及鸣谢
[1] Villalobos-Cantor, S.; Barrett, R. M.; Condon, A. F.; et al. Rapid cell type-specific nascent proteome labeling in Drosophila. eLife 2023, 12.
[2] Morral, C.; Stanisavljevic, J.; Batlle, E. Protocol for Efficient Protein Synthesis Detection by Click Chemistry in Colorectal Cancer Patient-Derived Organoids Grown In Vitro. STAR protocols 2020, 1 (2), 100103.
[3] Zou, D.; Li, K.; Lu, Y.; et al. Protocol for identifying protein synthesis activity in specific cell types of the testicular lumen. STAR protocols 2025, 6 (1), 103661.
[4] Yu, J.; Oentaryo, M. J.; Lee, C. W. Local protein synthesis of neuronal MT1-MMP for agrin-induced presynaptic development. Development (Cambridge, England) 2021, 148 (10).
[5] Hidalgo San Jose, L.; Signer, R. A. J. Cell-type-specific quantification of protein synthesis in vivo. Nature protocols 2019, 14 (2), 441-460.
[6] Li, Y.; Ji, X.; Chang, L.; et al. Click-iT ((R)) Plus OPP Alexa Fluor ((R)) Protein Synthesis Assay in Embryonic Cells. Bio-protocol 2022, 12 (11), e4441.
Archiver|手机版|科学网 ( 京ICP备07017567号-12 )
GMT+8, 2025-12-26 15:14
Powered by ScienceNet.cn
Copyright © 2007- 中国科学报社