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在微生物学和生物化学领域,麦角固醇(Ergosterol)作为一种重要的甾醇,扮演着举足轻重的角色。它主要存在于真菌(如酵母菌、霉菌)和某些植物体内,是真菌细胞膜的重要组成成分,关乎细胞膜的结构完整性、物质运输及细胞活力。
一、产品简介:
麦角固醇,别名麦角甾醇,为白色或无色光亮的小叶晶或白色结晶粉末。麦角甾醇不但具有独特的生理作用,还被广泛应用到药物的开发中。麦角甾醇作为真菌细胞膜的重要组成成分,结构稳定,专一性强,对确保细胞活力、膜的流动性、膜结合酶的活性、膜的完整性以及细胞物质运输等起着重要作用。对测定生物量来说,它比葡糖胺更具代表性 ,所以可以通过检测麦角甾醇的含量来测量真菌的生物量。
麦角固醇不仅是真菌细胞膜的关键成分,还能反映真菌的生物量和细胞膜完整性。通过检测麦角固醇的含量,科学家们可以了解真菌的生长状况和健康程度。这对于农业生产、食品安全、生物医药等领域都具有重要意义。
查询麦角固醇结构,其结构中含有一个C=C双键,在282nm出有特征吸收,因此可使用高效液相色谱法进行检测。
二、高效液相色谱技术:
为了准确测定麦角固醇的含量,采用了高效液相色谱(HPLC)技术,利用不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异,实现物质的分离和检测。这是一种先进的色谱分析方法,具有高灵敏度、高分辨率和高重现性等优点。通过优化色谱条件,如选择合适的色谱柱、流动相和检测波长,可以实现对沉香四醇的精确检测。
在HPLC检测中,通常使用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂,以甲醇作为流动相进行洗脱。检测波长设定为282nm,以确保对麦角固醇的准确检测。此外,还需要制备对照品溶液和样本溶液,并通过精密吸取和注入液相色谱仪进行测定。
三、液相检测步骤:
3.1 标准溶液的配制:
从冰箱取出标准品,室温平衡5min后震荡混匀,将标准品用超纯水进行稀释,得到不同浓度的标准品,针头式过滤器过滤后待测。
3.2 样本提取:
3.2.1 准确称取适量样本于离心管中,加入提取液,充分混匀,4℃浸提,超声提取,12000rpm离心5min,取上清,过0.22μm滤器待测。
3.2.2 液体样本:取液体样本,12000rpm离心5min,取上清,过0.22μm滤器待测。
3.3 上机检测:
分别精密吸取标准品溶液与样本溶液各5µL,注入液相色谱仪进行测定。通过比较标准品和样品中麦角固醇的峰面积,可以计算出样本中麦角固醇的含量。
四、麦角固醇含量的计算:
以标准品浓度(mg/mL)为横坐标,峰面积为纵坐标绘制麦角固醇标准曲线。将样品峰面积代入标准曲线,计算样品中麦角固醇含量(mg/mL)。
图1:麦角固醇标品峰图
图2:麦角固醇标准曲线
麦角固醇的液相检测是一项重要的生物化学分析技术,它在揭示真菌生物量、评估真菌健康程度等方面发挥着重要作用。
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