一、产品简介：

土壤荧光素二乙酸酯(FDA)水解酶与土壤总碳、全氮、全磷等土壤养分指标间关系密切，与微生物活性间的相关性比其他酶活性更显着，同时也能够很好地反映系统中有机质的转化和土壤中微生物的活性，是土壤健康质量的微生物学指标之一。

FDA 是一种无色化合物，在介质中能被许多土壤酶所催化水解，并经脱水反应，产生酶解终产物—荧光素，该黄色产物在 490nm 处有强吸收峰，通过检测 490nm 处的吸光值变化即可得出 FDA 水解酶活性。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵、天平、可调式移液器、30~50目筛、丙酮、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。

【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻。

2、标准溶液的配制：把5µmol/mL标准品母液用试剂一稀释成2、1.6、1.2、0.8、0.4 μmol/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至490nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

② 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的质量为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（µg）。

标准溶液的质量对应分别是：13.2924、10.63392、7.97544、5.31696、2.65848 µg。

2、按样本质量计算：

单位定义：每g土壤每小时产生1μg荧光素定义为一个酶活单位(U)。

FDA活性(U/g土样)=x÷W÷T×D=x÷W×D

T：反应时间，1h；                    W：土壤样本质量，g；                     

标准品分子质量：332.31g/mol；         D：稀释倍数，未稀释即为1。