一、产品简介：

土壤多酚氧化酶(Solid-Polyphenol oxidase，S-PPO)是一类以铜、锰为活性中心的氧化还原酶，主要来源于土壤微生物、植物根系分泌物及动植物残体分解释放的酶，能把土壤中芳香族化合物氧化成醌，醌与土壤中蛋白质、氨基酸、糖类、矿物等物质反应生成大小分子量不等有机质和色素，完成土壤芳香族化合物循环，也可用于土壤环境修复。

土壤多酚氧化酶能够催化底物左旋多巴产生红色的醌类物质，依据文献选择该有色产物在475nm做为特征光吸收波长，通过测定进而计算得出土壤多酚氧化酶活性大小。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵、天平、可调式移液器和30-50目筛。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50目筛。

【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；

2、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至475nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

② 正式实验按照预实验上机操作步骤进行。

五、结果计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下:

S-PPO活力计算：

单位定义：每小时每g土样中产生1nmoL红色产物定义为一个酶活力单位(U)。

S-PPO活力(U/g土样)=[ΔA÷(ε×d)×V×10⁹]÷W÷T×D=270.3×ΔA÷W×D

V：反应总体积，1×10^-3L；          T：反应时间，1h；

W：土壤样本实际取样量，g；       D：稀释倍数，未稀释即为1；

d：比色皿光径，1cm；              ε：红色产物摩尔吸光系数，3.7×10³ L/mol/cm。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下:

S-PPO活力计算：

单位定义：每小时每g土样中产生1nmoL红色产物定义为一个酶活力单位(U)。

    S-PPO活力(U/g土样)=[ΔA÷(ε×d)×V×10⁹]÷W÷T×D=540.5×ΔA÷W×D

V：反应总体积，1×10^-3L；          T：反应时间，1h；

W：土壤样本实际取样量，g；       D：稀释倍数，未稀释即为1；

d：96 孔板光径，0.5cm；           ε：红色产物摩尔吸光系数，3.7×10³ L/mol/cm。