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Tripterin (Celastrol) 是一种蛋白酶体抑制剂 |MedChemExpress (MCE)

已有 220 次阅读 2024-9-27 16:10 |系统分类:科研笔记

MCE 国际站：Celastrol

中文名：雷公藤红素

CAS：34157-83-0

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：Tripterin (Celastrol) 是一种蛋白酶体抑制剂，可有效且优先抑制纯化的20S 蛋白酶体 的胰凝乳蛋白酶样活性，IC 为 ₅₀ 为 2.5 μM。 IC50 和目标：IC50：2.5 μM（20S 蛋白酶体）^[1]

体外：雷公藤多酚 (Celastrol) 以浓度依赖性方式显着抑制 PC-3 细胞中蛋白酶体胰凝乳蛋白酶的活性；在 2.5 μM 时，它达到约 55% 的抑制，与其对纯化的 20S 蛋白酶体的效力相当 (IC₅₀=2.5 μM)。此外，观察到 IκB-α、Bax 和 p27 水平升高，这是用 Celastrol 处理的 PC-3 细胞中蛋白酶体的三种众所周知的靶蛋白^[1]。

体内：用雷公藤多酚 (Celastrol)（1-3 mg/kg/d，腹腔注射，1-31 天）治疗 PC-3 荷瘤裸鼠，显着抑制肿瘤生长 (65-93%)^{[ 1]}。用 3 和 6 mg/kg 雷公藤多酚 (Celastrol) 处理后，丙二醛 (MDA) 水平分别显着降低 35.2% 和 36.7% (P<0.05)。用 3 和 6 mg/kg 雷公藤多酚 (Celastrol) 治疗可显着将 GSH 水平 (P<0.05) 恢复到几乎正常水平^[2]。

激酶试验：将纯化的兔 20S 蛋白酶体 (0.1 μg) 与 40 μM 各种荧光肽底物在 100 μL 测定缓冲液（20 mM Tris-HCl，pH 7.5）中在不同浓度的雷公藤红素或冬凌草甲素存在下或在溶剂 DMSO 中孵育37°C 2 小时，然后测量每种蛋白酶体活性的抑制情况[1]。

细胞试验：将前列腺癌细胞 (5,000-8,000) 接种于 96 孔板的每个孔中，然后用不同浓度的 DMSO、雷公藤红素或冬凌草甲素处理 12 至 16 小时，然后再用 Z- 孵育 2 小时。 Gly-Gly-Leu-AMC（40 μM）。之后，使用整个板测量蛋白酶体活性[1]。

动物体内实验:小鼠[1] 使用5周龄的雄性免疫缺陷裸鼠NCRNU-M。第 0 天，将悬浮在 0.1 mL 无血清 RPMI 1640 中的人前列腺癌 PC-3 或 C4-2B 细胞 (5-10×106) 皮下接种到每只小鼠的右侧（每组四只小鼠）。对于使用 PC-3 细胞的第一个实验，在接种后第 14 天，动物开始每天腹腔注射 50 至 100 μL 载体 [10% DMSO、70% Cremophor/乙醇 (3:1) 和 20% PBS]和1.0或3.0mg/kg雷公藤红醇。每天使用卡尺测量肿瘤大小，并使用标准公式计算肿瘤体积：宽度2×长度/2。每周测量体重。为了研究蛋白酶体是否在实验的早期阶段被抑制，在治疗3天后，处死一只对照小鼠和一只经3.0mg/kg雷公藤红素处理的小鼠。治疗 16 天后，当对照肿瘤达到 1,400 mm3 时，将其余部分处死。对于第二次 PC-3 肿瘤实验，接种后 12 天，将小鼠随机分为三组，并在研究期间（31 天）用对照、雷公藤红素或冬凌草甲素以每天 1.5 mg/kg 的剂量进行治疗。在另一项实验中，为了研究雷公藤红素对 AR 表达的影响，携带 C4-2B 肿瘤的裸鼠每天接受载体或 3.0 mg/kg 雷公藤红醇的腹腔注射。大鼠[2]雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠（n=90，6周龄），体重161±9g，随机分为对照组（NC）和高能饮食（HED）组。在对照组中，动物接受标准饲料，而 HED 组中的大鼠则额外喂食高能乳剂。各自饮食8周后，将链脲佐菌素（STZ；45 mg/kg）溶解于0.1 mol/l柠檬酸盐缓冲液（pH 4.5）中注射到HED组大鼠的尾静脉中以建立T2DM模型，而对照组大鼠注射柠檬酸钠缓冲液。选择注射STZ后7天血糖水平≥16.7 mM的大鼠作为糖尿病模型。平均而言，80% 注射 STZ 的大鼠符合这些标准。注射STZ后1周，将成功诱导糖尿病的大鼠随机分为糖尿病模型（DM）组、雷公藤红素低剂量组（1 mg/kg/day）、雷公藤红素中剂量组（1 mg/kg/day）。 3 mg/kg/天）和雷公藤红素高剂量组（6 mg/kg/天）（每组 n=15 只大鼠）。治疗组大鼠灌胃雷公藤红醇，NC组和DM组大鼠灌胃等量蒸馏水（2 mL）。分别治疗8周后，通过腹膜内注射戊巴比妥钠（30mg/kg体重）麻醉大鼠并收集组织样本用于分析。从大鼠体内切下椎旁肌肉，并沿纵轴垂直切割并固定在磷酸盐缓冲的20％甲醛中。然后制备组织学石蜡包埋切片 (5 μm) 用于 H&E 染色。将椎旁肌肉切片在液氮中速冻并保存在 80°C 下直至进一步分析。

研究领域：Metabolic Enzyme/Protease | Autophagy | Apoptosis

作用靶点：Proteasome | Autophagy | Mitophagy | Apoptosis | Endogenous Metabolite

参考文献：[1]. Yang H, et al. Celastrol, a triterpene extracted from the Chinese "Thunder of God Vine," is a potent proteasome inhibitor and suppresses human prostate cancer growth in nude mice. Cancer Res. 2006 May 1;66(9):4758-65

[2]. Guan Y, et al. Celastrol attenuates oxidative stress in the skeletal muscle of diabetic rats by regulating the AMPK-PGC1α-SIRT3 signaling pathway. Int J Mol Med. 2016 May;37(5):1229-38.