一、产品简介：

纤维二糖水解酶(CBH，EC3.2.1.91)存在于细菌、真菌和动物体内，是纤维素酶系的组份之一，CBH作用于纤维素线状分子的末端，水解β-葡萄糖苷键。

S-CBH能够催化对硝基苯纤维二糖苷(PNPC)生成对-硝基苯酚，该物质在400nm有特征光吸收，进而得到土壤纤维二糖水解酶（S-CBH）活性。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵、天平、可调式移液器、30-50目筛、甲苯和蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50目筛。

【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；

2、标准溶液的配制：把5μmoL/mL（=5000nmoL/mL）标准品母液用蒸馏水稀释成300、200、100、50、25、12.5nmoL/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将上清液用试剂二适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的W和D代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（nmoL/mL）。

2、S-CBH活力计算：

单位定义：每天每g土样中产生1μmoL对-硝基苯酚（PNP）定义为一个酶活力单位(U)。

S-CBH活力(U/g土样)=x×V÷1000÷W÷T×D=0.00396x÷W×D

V：反应总体积，0.165mL；          T：反应时间，1h=1/24d；

W：土壤样本实际取样量，g；        D：稀释倍数，未稀释即为1。