一、产品简介：

维生素 E（Vitamin E）是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是生物体中最主要的抗氧化剂之一，能阻止不饱和脂肪酸收到过氧化作用的损伤，维持不饱和脂肪酸细胞膜的完整性和正常功能，具有延缓衰老、预防溶血性贫血作用，在医药、化妆品、保健品、食品行业具有较高的应用价值。  VE还原Fe³⁺为Fe²⁺，Fe²⁺与1,10-菲啰啉产生有色络合物，在530nm有特征吸收峰。

二、试剂盒组分与配制：

三、需自备的仪器和用品：

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、漩涡震荡仪、可调式移液器、无水乙醇、正庚烷、冰、蒸馏水。

四、操作步骤：

建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、预实验样本制备

① 组织样本：称取约 0.1g 组织，加入200µL蒸馏水，再加入300µL试剂一和500µL试剂二，进行匀浆，匀浆后在旋涡混匀仪上震荡5min（充分抽提）。5000g，25℃离心 5min，取上层正庚烷抽提液 300µL 加入到 900µL 无水乙醇中（按照上层抽提液：无水乙醇=1:3）混匀待测。

② 血清（血浆）样本：取血清（血浆）200µL，加入200µL蒸馏水，再加入300µL试剂一和500µL试剂二，进行匀浆，匀浆后在旋涡混匀仪上震荡5min（充分抽提）。5000g，25℃离心 5min，取上层正庚烷抽提液 300µL 加入到 900µL 无水乙醇中（上层抽提液：无水乙醇=1:3）混匀待测。

2、标准溶液的配制：把2 mg/mL 的标准品母液用试剂一稀释成100、50、25、12.5、6.25、3.125 µg/mL的标准溶液备用。

3、预实验上机操作：

① 酶标仪预热30min以上，调节波长至530nm。

② 操作表：

4、正式实验：

① 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本用试剂一适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的D和W代入公式计算；

② 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；

③ 正式实验按照预实验操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

五、结果计算：

1、以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μg/mL）。

2、按样本质量计算：

VE含量(μg/g 质量) =x×4×V÷W=2x÷W

3、按血清（血浆）体积计算：

VE含量（μg/mL）=x×4×V÷V1=10x

4：待测样本为300µL的正庚烷抽提液加900µL的无水乙醇，相当于将抽提样本稀释4倍后检测；

V：提取过程加入正庚烷的体积，0.5mL；

V1：提取过程中加入血清（浆）体积，0.2mL；

W：样本质量，g。

注意事项：

1、离心后，在吸取上层正庚烷抽提液时，切勿将中间无水乙醇与水的液相层吸入，以免影响试验结果。

2、若反应体系产生沉淀，建议将待测样本用试剂一进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。

3、比色皿需用无水乙醇冲洗，勿用蒸馏水以防出现分层影响试验数据。

4、显色结束后尽快完成测定。